24小时热门版块排行榜    

查看: 1924  |  回复: 3
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

ruchang2013

铁虫 (初入文坛)

[求助] 有有效的方法检验酶切效率吗 已有2人参与

最近的单酶切实验一直连接不上核酸片段。载体是pTKIP-cat,单酶切位点是ApaI,核酸片段2端也设计了ApaI酶切位点。我发觉是不是载体像平末端一样容易自连,去磷酸化延长至45min也不管事.我认为若果酶切不彻底,那么导致去磷酸化等于白做,而且若是有一部分酶切成功,去磷酸化过头,那么就等于把酶切好的载体去坏了
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

万丽丽081222

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-05-20 11:25:57
ruchang2013: 金币+3 2014-05-22 19:03:42
你酶切结束后,点上loading buffer,然后跑胶,切胶纯化后在连接。
你做这个单酶切的目的是什么啊?pTKIP-cat这个载体有什么特殊的性质吗?如果实在不行就换载体。
learnenglish
3楼2014-05-20 11:16:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 4 个回答

再来一次

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-05-20 11:25:48
ruchang2013: 金币+2, 有帮助 2014-05-22 19:03:33
加大一下载体的量,延长酶切时间。
ps:考察酶切效率,方法倒是有,不过又费事又不准确,你个简单酶切不至于这么麻烦。
pps:所有的酶其实都不像它说明书上描述的那样高效
2楼2014-05-20 10:48:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

再来一次

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 万丽丽081222 at 2014-05-20 11:16:57
你酶切结束后,点上loading buffer,然后跑胶,切胶纯化后在连接。
你做这个单酶切的目的是什么啊?pTKIP-cat这个载体有什么特殊的性质吗?如果实在不行就换载体。

纯化后载体回收经常容易丢失啊,妹子
4楼2014-05-21 14:18:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料调剂 +6 匹克i 2026-03-23 6/300 2026-03-24 21:09 by greychen00
[考研] 化工专硕求调剂 +3 question挽风 2026-03-24 3/150 2026-03-24 18:48 by jhhcooi
[考研] 274求调剂 +5 顾九笙要谦虚 2026-03-24 5/250 2026-03-24 18:43 by jhhcooi
[考研] 招08考数学 +7 laoshidan 2026-03-20 16/800 2026-03-24 17:52 by 乌拉儿山脉
[考研] 材料专硕331求调剂 +4 鲜当牛 2026-03-24 4/200 2026-03-24 15:58 by JourneyLucky
[考研] 341求调剂(一志愿湖南大学070300) +5 番茄头--- 2026-03-22 6/300 2026-03-23 23:45 by Txy@872106
[考研] 一志愿国科过程所081700,274求调剂 +3 三水研0水立方 2026-03-23 3/150 2026-03-23 23:11 by MajorWen
[考研] 一志愿070300浙大化学358分,求调剂! +4 酥酥鱼.. 2026-03-21 4/200 2026-03-23 08:12 by Iveryant
[考研] 289材料与化工(085600)B区求调剂 +3 这么名字咋样 2026-03-22 4/200 2026-03-22 17:56 by 云民大李老师
[考研] 一志愿 西北大学 ,070300化学学硕,总分287,双非一本,求调剂。 +3 晨昏线与星海 2026-03-20 3/150 2026-03-22 16:00 by ColorlessPI
[考研] 260求调剂 +3 朱芷琳 2026-03-20 4/200 2026-03-22 15:12 by 朱芷琳
[考研] 求调剂 +7 Auroracx 2026-03-22 7/350 2026-03-22 12:38 by 素颜倾城1988
[考研] 考研调剂 +4 来好运来来来 2026-03-21 4/200 2026-03-22 12:15 by 星空星月
[考研] 求调剂 +3 .m.. 2026-03-21 4/200 2026-03-21 16:25 by barlinike
[考研] 279求调剂 +5 红衣隐官 2026-03-21 5/250 2026-03-21 14:59 by lature00
[考研] 材料与化工(0856)304求 B区 调剂 +3 邱gl 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:47 by lature00
[考研] 材料学学硕080502 337求调剂-一志愿华中科技大学 +4 顺顺顺mr 2026-03-18 5/250 2026-03-21 10:22 by luoyongfeng
[考研] 求调剂一志愿南京航空航天大学289分 +3 @taotao 2026-03-19 3/150 2026-03-20 21:34 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 eation27 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:32 by JourneyLucky
[考研] 085410人工智能专硕317求调剂(0854都可以) +4 xbxudjdn 2026-03-18 4/200 2026-03-20 09:07 by 不168
信息提示
请填处理意见