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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 有有效的方法检验酶切效率吗
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ruchang2013

铁虫 (初入文坛)

[求助] 有有效的方法检验酶切效率吗 已有2人参与

最近的单酶切实验一直连接不上核酸片段。载体是pTKIP-cat,单酶切位点是ApaI，核酸片段2端也设计了ApaI酶切位点。我发觉是不是载体像平末端一样容易自连，去磷酸化延长至45min也不管事.我认为若果酶切不彻底，那么导致去磷酸化等于白做，而且若是有一部分酶切成功，去磷酸化过头，那么就等于把酶切好的载体去坏了
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1楼 2014-05-19 09:24:45
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万丽丽081222

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-05-20 11:25:57
ruchang2013: 金币+3 2014-05-22 19:03:42
你酶切结束后，点上loading buffer,然后跑胶，切胶纯化后在连接。
你做这个单酶切的目的是什么啊？pTKIP-cat这个载体有什么特殊的性质吗？如果实在不行就换载体。
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learnenglish
3楼2014-05-20 11:16:57
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再来一次

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-05-20 11:25:48
ruchang2013: 金币+2, ★有帮助 2014-05-22 19:03:33
加大一下载体的量，延长酶切时间。
ps：考察酶切效率，方法倒是有，不过又费事又不准确，你个简单酶切不至于这么麻烦。
pps：所有的酶其实都不像它说明书上描述的那样高效
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2楼2014-05-20 10:48:42
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再来一次

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 万丽丽081222 at 2014-05-20 11:16:57
你酶切结束后，点上loading buffer,然后跑胶，切胶纯化后在连接。
你做这个单酶切的目的是什么啊？pTKIP-cat这个载体有什么特殊的性质吗？如果实在不行就换载体。

纯化后载体回收经常容易丢失啊，妹子
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4楼2014-05-21 14:18:51
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