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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR还是跑不出条带啊
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铿锵爪神

金虫 (正式写手)

[求助] PCR还是跑不出条带啊 已有6人参与

如题，新人做PCR，各种优化方法各种跑不出条带，超级虐心啊，求助大神帮忙，不胜感激

PCR还是跑不出条带啊
1.jpg
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1楼 2015-11-04 20:31:24
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wcq吴超群

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
写的详细点？反应体系？

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2楼2015-11-04 21:13:57
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fengerwin1

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
铿锵爪神: 金币+1, ★有帮助 2015-11-05 23:12:39
引物浓度是否过高？普通PCR退火55度一般没问题

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3楼2015-11-04 21:15:43
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陈爱中

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
pcr这种问题，问问同实验室的高年级同学就行了，可以问的更具体详细。
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4楼2015-11-04 22:38:02
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铿锵爪神

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 陈爱中 at 2015-11-04 22:38:02
pcr这种问题，问问同实验室的高年级同学就行了，可以问的更具体详细。

主要是实验室情况有些复杂，前辈都毕业了，一切都得自己摸索，真心伤不起啊

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5楼2015-11-04 22:40:33
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陈爱中

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
铿锵爪神: 金币+1, ★有帮助 2015-11-04 22:52:09
铿锵爪神: 金币+3 2015-11-08 09:52:33
引用回帖:
5楼: Originally posted by 铿锵爪神 at 2015-11-04 22:40:33
主要是实验室情况有些复杂，前辈都毕业了，一切都得自己摸索，真心伤不起啊
...

反应体系什么的你照着试剂使用说明的体系加就可以。

记住模板要稀释。
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6楼2015-11-04 22:45:56
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铿锵爪神

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 陈爱中 at 2015-11-04 22:45:56
反应体系什么的你照着试剂使用说明的体系加就可以。

记住模板要稀释。...

模板要稀释？我的模板是反转录得到的？还怎么稀释啊？我好像真没有稀释过

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7楼2015-11-04 22:51:54
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陈爱中

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 铿锵爪神 at 2015-11-04 22:51:54
模板要稀释？我的模板是反转录得到的？还怎么稀释啊？我好像真没有稀释过
...

有可能你RT就失败了，根本没有你想象的cDNA！

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8楼2015-11-04 22:56:45
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shanyue00

铁杆木虫 (著名写手)
给出反应体系和模板

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耐心说话，好好说话！
9楼2015-11-04 23:00:34
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铿锵爪神

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wcq吴超群 at 2015-11-04 21:13:57
写的详细点？反应体系？

25微的体系，模板和引物都是1微，Taq酶0.3微，dNTP4微，Taq Buffer2.5微，超纯水补充至25微

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10楼2015-11-05 22:38:55
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