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求助啊~~~PCR有时候能扩出目的条带，有的时候不可以
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巢式PCR，摸条件，直接跑第二次的琼脂糖。 用了12个模板，一共扩出来7个，扩出来的效果非常好，条带明亮无杂带，扩增不出来的隐约可见目的条带的影子，高二聚体 第一次换了酶，多扩增出来一个模板，后来用的是换的酶，也有一半没有扩出来的，所以问题可能不是出在酶上面 换了BUFFER，没有扩增出来的5个目的条带依然是模糊的影子，但是要好于没有更换BUFFER的时候 考虑是第一次扩增不好，但是又能跑出7个，现在不知道怎么办了。 需要考虑更换引物吗？更换第一对还是第二队呢？ 特此请教！ （师姐说模板应该没有问题，就算有问题也不会这么多都有问题） |
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