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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR还是跑不出条带啊
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铿锵爪神

金虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by shanyue00 at 2015-11-04 23:00:34
给出反应体系和模板

25微的体系，模板和引物都是1微，Taq酶0.3微，dNTP4微，Taq Buffer2.5微，超纯水补充至25微

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11楼2015-11-05 22:39:02
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shanyue00

铁杆木虫 (著名写手)
你们实验室都是这个体系么

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耐心说话，好好说话！
12楼2015-11-05 22:40:24
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MMCCBB

新虫 (著名写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 铿锵爪神 at 2015-11-05 22:38:55
25微的体系，模板和引物都是1微，Taq酶0.3微，dNTP4微，Taq Buffer2.5微，超纯水补充至25微
...

模板的浓度？

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13楼2015-11-05 22:44:00
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铿锵爪神

金虫 (正式写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by MMCCBB at 2015-11-05 22:44:00
模板的浓度？
...

模板浓度没有测过，但当初提RNA的时候效果是很好的，提完直接就反转录了

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14楼2015-11-05 22:47:13
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铿锵爪神

金虫 (正式写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by shanyue00 at 2015-11-05 22:40:24
你们实验室都是这个体系么

差不多吧，师姐的论文是这样的

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15楼2015-11-05 22:47:39
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shanyue00

铁杆木虫 (著名写手)
也就是现在模板是好的，引物是好的，温度体系是对的，就是扩不出条带来？

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耐心说话，好好说话！
16楼2015-11-05 22:54:20
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chenyuanxmc

金虫 (著名写手)
先做个对照确定一下模板和聚合酶有没有问题

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17楼2015-11-05 22:57:32
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铿锵爪神

金虫 (正式写手)
引用回帖:
16楼: Originally posted by shanyue00 at 2015-11-05 22:54:20
也就是现在模板是好的，引物是好的，温度体系是对的，就是扩不出条带来？

是的呢，苦恼死了都

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18楼2015-11-05 23:11:17
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铿锵爪神

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by fengerwin1 at 2015-11-04 21:15:43
引物浓度是否过高？普通PCR退火55度一般没问题

引物是10微摩的浓度加1微升，应该不算高吧？

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19楼2015-11-05 23:13:37
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kunkuncow

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
降低退火温度试一试
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方式分额
20楼2015-11-06 00:05:12
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