24小时热门版块排行榜    

查看: 2574  |  回复: 11

18273176704

新虫 (初入文坛)

[求助] pcr出来亮带了,但不是目的条带,什么原因。还可以送去测测序吗还是mark的问题啊 已有3人参与

普通pcr。2xEasy  Mix  混合做的。做了一个梯度,50.52.54.56.58.60.都单一亮带,但是我的目的条带在1300bp左右,单一亮带在1000以内。。这种情况可能是什么原因啊,新手请求大神们指导。。感谢。

pcr出来亮带了,但不是目的条带,什么原因。还可以送去测测序吗还是mark的问题啊
PCR11.02.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

铭记那些不可回首。。。相信自己。。。
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

陈爱中

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-11-03 23:03:10
marker看着有点糊啊,但是应该不是marker的问题,如果marker降解的的话应该是显示你的条带大于你的预期值。

这种情况我感觉可能是你的目标序列内部存在你的引物互补位点,建议你仔细检查一下。
5楼2015-11-03 22:17:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

w_goodluck

铜虫 (小有名气)

的确可以测序看看 测序不贵 三四天出结果 能扩增出来单一条带 一般引物问题不会太大 如果说是引物可能和和内部序列匹配 那么多梯度温度扩增应该有的温度下出现两个条带 即使1300哪那个条带比较浅。建议测序后再分析原因,然后重新设计引物。

发自小木虫Android客户端
8楼2015-11-04 08:31:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

wcq吴超群

新虫 (小有名气)

会不会是引物的问题,引物有错?

发自小木虫Android客户端
2楼2015-11-03 20:20:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

18273176704

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wcq吴超群 at 2015-11-03 20:20:42
会不会是引物的问题,引物有错?

我是对比了几种鱼的同源序列,在保守片段设计的引物。。用prim设计的。
铭记那些不可回首。。。相信自己。。。
3楼2015-11-03 21:27:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

咖啡豆G

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-11-03 23:02:56
重新做个温度梯度试试,条带不对应该不是marker的问题,也不用送去测序吧,直到条带在目的大小附近了再测序吧
4楼2015-11-03 21:45:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

18273176704

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 陈爱中 at 2015-11-03 22:17:43
marker看着有点糊啊,但是应该不是marker的问题,如果marker降解的的话应该是显示你的条带大于你的预期值。

这种情况我感觉可能是你的目标序列内部存在你的引物互补位点,建议你仔细检查一下。

引物只有三个连续碱基互补,应该没问题吧,用primer设计的时候,打分挺好的。。。我应该怎么检查啊
铭记那些不可回首。。。相信自己。。。
6楼2015-11-04 08:24:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

18273176704

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 咖啡豆G at 2015-11-03 21:45:42
重新做个温度梯度试试,条带不对应该不是marker的问题,也不用送去测序吧,直到条带在目的大小附近了再测序吧

重新做了。。还是在750那目的片段,,,,好崩溃。。好不容易p出来,,又不是的,我们师兄说可以拿去测测看是什么。
铭记那些不可回首。。。相信自己。。。
7楼2015-11-04 08:27:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaolu0713

新虫 (著名写手)

测序吧,有些马克实在是不敢恭维

发自小木虫Android客户端
9楼2015-11-04 09:49:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

18273176704

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by w_goodluck at 2015-11-04 08:31:40
的确可以测序看看 测序不贵 三四天出结果 能扩增出来单一条带 一般引物问题不会太大 如果说是引物可能和和内部序列匹配 那么多梯度温度扩增应该有的温度下出现两个条带 即使1300哪那个条带比较浅。建议测序后再分析 ...

这次的引物就是重新设计。刚回的啊。。。这基因快折磨死我了。之前设计了三队引物呢。之前就是也做了温度梯度。。可是一直是模糊条带要不就没带。。怎么增加循环数。改模板引物浓度都没用。。这次好不容条带亮了。又不是目的片段。。原因一直找不到。。
铭记那些不可回首。。。相信自己。。。
10楼2015-11-04 09:51:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 18273176704 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 基金中了 +14 laoda193707 2026-08-06 14/700 2026-08-08 00:23 by 实验小白ha
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 娱乐 +6 Tide man 2026-08-03 6/300 2026-08-07 22:40 by 铁帽子农民
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变,有变的大神么? +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] 关于代码变化问题,想知道的进来 +9 且听虎啸 2026-08-07 12/600 2026-08-07 21:53 by 理想三旬2025
[基金申请] 固定端突然变了,今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] 听说今天filecode变了 +24 布布和一二 2026-08-06 47/2350 2026-08-07 16:02 by zhiyanjiang
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +3 布布和一二 2026-08-07 3/150 2026-08-07 15:09 by gltch
[基金申请] 大家散了吧,后缀研究没有意义,别浪费时间了,过好目前的每一天,不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 8月时间戳变的,举个手。玩一下,释放压力 +9 archvillain 2026-08-04 11/550 2026-08-05 20:06 by wlwhappy
[基金申请] 好消息?这个有何含义??? +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[考博] 【2027博士申请】纳米药物递送方向 20+3 13586093586 2026-08-03 4/200 2026-08-05 09:59 by lfy8008
[基金申请] 有没有H口的?有收到消息的吗? +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
[基金申请] 纯娱乐,不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
[基金申请] 面上提前没消息,有中的吗 +14 archvillain 2026-08-02 18/900 2026-08-04 14:42 by archvillain
[基金申请] 什么时候能放榜呀? +3 Jacob678 2026-08-03 3/150 2026-08-03 16:14 by gltch
信息提示
请填处理意见