24小时热门版块排行榜    

查看: 2678  |  回复: 11

18273176704

新虫 (初入文坛)

[求助] pcr出来亮带了,但不是目的条带,什么原因。还可以送去测测序吗还是mark的问题啊 已有3人参与

普通pcr。2xEasy  Mix  混合做的。做了一个梯度,50.52.54.56.58.60.都单一亮带,但是我的目的条带在1300bp左右,单一亮带在1000以内。。这种情况可能是什么原因啊,新手请求大神们指导。。感谢。

pcr出来亮带了,但不是目的条带,什么原因。还可以送去测测序吗还是mark的问题啊
PCR11.02.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

铭记那些不可回首。。。相信自己。。。
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

陈爱中

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-11-03 23:03:10
marker看着有点糊啊,但是应该不是marker的问题,如果marker降解的的话应该是显示你的条带大于你的预期值。

这种情况我感觉可能是你的目标序列内部存在你的引物互补位点,建议你仔细检查一下。
5楼2015-11-03 22:17:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

w_goodluck

铜虫 (小有名气)

的确可以测序看看 测序不贵 三四天出结果 能扩增出来单一条带 一般引物问题不会太大 如果说是引物可能和和内部序列匹配 那么多梯度温度扩增应该有的温度下出现两个条带 即使1300哪那个条带比较浅。建议测序后再分析原因,然后重新设计引物。

发自小木虫Android客户端
8楼2015-11-04 08:31:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

wcq吴超群

新虫 (小有名气)

会不会是引物的问题,引物有错?

发自小木虫Android客户端
2楼2015-11-03 20:20:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

18273176704

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wcq吴超群 at 2015-11-03 20:20:42
会不会是引物的问题,引物有错?

我是对比了几种鱼的同源序列,在保守片段设计的引物。。用prim设计的。
铭记那些不可回首。。。相信自己。。。
3楼2015-11-03 21:27:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

咖啡豆G

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-11-03 23:02:56
重新做个温度梯度试试,条带不对应该不是marker的问题,也不用送去测序吧,直到条带在目的大小附近了再测序吧
4楼2015-11-03 21:45:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

18273176704

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 陈爱中 at 2015-11-03 22:17:43
marker看着有点糊啊,但是应该不是marker的问题,如果marker降解的的话应该是显示你的条带大于你的预期值。

这种情况我感觉可能是你的目标序列内部存在你的引物互补位点,建议你仔细检查一下。

引物只有三个连续碱基互补,应该没问题吧,用primer设计的时候,打分挺好的。。。我应该怎么检查啊
铭记那些不可回首。。。相信自己。。。
6楼2015-11-04 08:24:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

18273176704

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 咖啡豆G at 2015-11-03 21:45:42
重新做个温度梯度试试,条带不对应该不是marker的问题,也不用送去测序吧,直到条带在目的大小附近了再测序吧

重新做了。。还是在750那目的片段,,,,好崩溃。。好不容易p出来,,又不是的,我们师兄说可以拿去测测看是什么。
铭记那些不可回首。。。相信自己。。。
7楼2015-11-04 08:27:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaolu0713

新虫 (著名写手)

测序吧,有些马克实在是不敢恭维

发自小木虫Android客户端
9楼2015-11-04 09:49:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

18273176704

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by w_goodluck at 2015-11-04 08:31:40
的确可以测序看看 测序不贵 三四天出结果 能扩增出来单一条带 一般引物问题不会太大 如果说是引物可能和和内部序列匹配 那么多梯度温度扩增应该有的温度下出现两个条带 即使1300哪那个条带比较浅。建议测序后再分析 ...

这次的引物就是重新设计。刚回的啊。。。这基因快折磨死我了。之前设计了三队引物呢。之前就是也做了温度梯度。。可是一直是模糊条带要不就没带。。怎么增加循环数。改模板引物浓度都没用。。这次好不容条带亮了。又不是目的片段。。原因一直找不到。。
铭记那些不可回首。。。相信自己。。。
10楼2015-11-04 09:51:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 18273176704 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 4/200 2026-09-16 07:48 by i0IGWqQuchto
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 40ms4Wlo4umh 2026-09-14 3/150 2026-09-16 06:48 by LH5NkK5Ud4bh
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +7 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 8/400 2026-09-16 02:23 by DgNGHc3h5tPl
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 5/250 2026-09-16 02:14 by DgNGHc3h5tPl
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 3/150 2026-09-15 20:26 by zNcEhTcH7ihq
[考研] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 0pYnUiPDfdnk 2026-09-14 3/150 2026-09-15 19:35 by CgyNCDVNhGVg
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 17:39 by CgyNCDVNhGVg
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 5/250 2026-09-15 16:35 by CgyNCDVNhGVg
[公派出国] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 4/200 2026-09-15 16:26 by CgyNCDVNhGVg
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-15 14:58 by CgyNCDVNhGVg
[考博] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 6/300 2026-09-15 14:25 by VMDqgnlKimtZ
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +7 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 9/450 2026-09-15 14:10 by VMDqgnlKimtZ
[公派出国] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 08:58 by C79jjtjAKjEn
[教师之家] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 08:14 by C79jjtjAKjEn
[考博] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 07:58 by C79jjtjAKjEn
[教师之家] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 3/150 2026-09-15 07:46 by C79jjtjAKjEn
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +6 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 6/300 2026-09-15 05:50 by 5BDX0d0WFp7t
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 6/300 2026-09-15 05:38 by 5BDX0d0WFp7t
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 5/250 2026-09-14 21:25 by vZfe6xYu34yj
[教师之家] 浙江师范大学是怎么坑我的 +10 recruit123 2026-09-09 15/750 2026-09-13 10:45 by seaskyy
信息提示
请填处理意见