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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » pcr出来亮带了，但不是目的条带，什么原因。还可以送去测测序吗还是mark的问题啊
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18273176704

新虫 (初入文坛)

[求助] pcr出来亮带了，但不是目的条带，什么原因。还可以送去测测序吗还是mark的问题啊 已有3人参与

普通pcr。2xEasy  Mix  混合做的。做了一个梯度，50.52.54.56.58.60.都单一亮带，但是我的目的条带在1300bp左右，单一亮带在1000以内。。这种情况可能是什么原因啊，新手请求大神们指导。。感谢。

pcr出来亮带了，但不是目的条带，什么原因。还可以送去测测序吗还是mark的问题啊
PCR11.02.jpg
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铭记那些不可回首。。。相信自己。。。
1楼 2015-11-03 19:50:19
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18273176704

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by w_goodluck at 2015-11-04 08:31:40
的确可以测序看看 测序不贵 三四天出结果 能扩增出来单一条带 一般引物问题不会太大 如果说是引物可能和和内部序列匹配 那么多梯度温度扩增应该有的温度下出现两个条带 即使1300哪那个条带比较浅。建议测序后再分析 ...

这次的引物就是重新设计。刚回的啊。。。这基因快折磨死我了。之前设计了三队引物呢。之前就是也做了温度梯度。。可是一直是模糊条带要不就没带。。怎么增加循环数。改模板引物浓度都没用。。这次好不容条带亮了。又不是目的片段。。原因一直找不到。。
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铭记那些不可回首。。。相信自己。。。
10楼2015-11-04 09:51:42
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wcq吴超群

新虫 (小有名气)
会不会是引物的问题，引物有错？

发自小木虫Android客户端
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2楼2015-11-03 20:20:42
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18273176704

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wcq吴超群 at 2015-11-03 20:20:42
会不会是引物的问题，引物有错？

我是对比了几种鱼的同源序列，在保守片段设计的引物。。用prim设计的。
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铭记那些不可回首。。。相信自己。。。
3楼2015-11-03 21:27:48
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咖啡豆G

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-11-03 23:02:56
重新做个温度梯度试试，条带不对应该不是marker的问题，也不用送去测序吧，直到条带在目的大小附近了再测序吧
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4楼2015-11-03 21:45:42
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