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新虫 (初入文坛)

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[求助] pcr出来亮带了，但不是目的条带，什么原因。还可以送去测测序吗还是mark的问题啊已有3人参与

普通pcr。2xEasy Mix 混合做的。做了一个梯度，50.52.54.56.58.60.都单一亮带，但是我的目的条带在1300bp左右，单一亮带在1000以内。。这种情况可能是什么原因啊，新手请求大神们指导。。感谢。

PCR11.02.jpg

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铭记那些不可回首。。。相信自己。。。

1楼 2015-11-03 19:50:19

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引用回帖:

8楼: Originally posted by w_goodluck at 2015-11-04 08:31:40
的确可以测序看看测序不贵三四天出结果能扩增出来单一条带一般引物问题不会太大如果说是引物可能和和内部序列匹配那么多梯度温度扩增应该有的温度下出现两个条带即使1300哪那个条带比较浅。建议测序后再分析 ...

这次的引物就是重新设计。刚回的啊。。。这基因快折磨死我了。之前设计了三队引物呢。之前就是也做了温度梯度。。可是一直是模糊条带要不就没带。。怎么增加循环数。改模板引物浓度都没用。。这次好不容条带亮了。又不是目的片段。。原因一直找不到。。