24小时热门版块排行榜    

查看: 2595  |  回复: 11

18273176704

新虫 (初入文坛)

[求助] pcr出来亮带了,但不是目的条带,什么原因。还可以送去测测序吗还是mark的问题啊 已有3人参与

普通pcr。2xEasy  Mix  混合做的。做了一个梯度,50.52.54.56.58.60.都单一亮带,但是我的目的条带在1300bp左右,单一亮带在1000以内。。这种情况可能是什么原因啊,新手请求大神们指导。。感谢。

pcr出来亮带了,但不是目的条带,什么原因。还可以送去测测序吗还是mark的问题啊
PCR11.02.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

铭记那些不可回首。。。相信自己。。。
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

陈爱中

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-11-03 23:03:10
marker看着有点糊啊,但是应该不是marker的问题,如果marker降解的的话应该是显示你的条带大于你的预期值。

这种情况我感觉可能是你的目标序列内部存在你的引物互补位点,建议你仔细检查一下。
5楼2015-11-03 22:17:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

w_goodluck

铜虫 (小有名气)

的确可以测序看看 测序不贵 三四天出结果 能扩增出来单一条带 一般引物问题不会太大 如果说是引物可能和和内部序列匹配 那么多梯度温度扩增应该有的温度下出现两个条带 即使1300哪那个条带比较浅。建议测序后再分析原因,然后重新设计引物。

发自小木虫Android客户端
8楼2015-11-04 08:31:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

wcq吴超群

新虫 (小有名气)

会不会是引物的问题,引物有错?

发自小木虫Android客户端
2楼2015-11-03 20:20:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

18273176704

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wcq吴超群 at 2015-11-03 20:20:42
会不会是引物的问题,引物有错?

我是对比了几种鱼的同源序列,在保守片段设计的引物。。用prim设计的。
铭记那些不可回首。。。相信自己。。。
3楼2015-11-03 21:27:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

咖啡豆G

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-11-03 23:02:56
重新做个温度梯度试试,条带不对应该不是marker的问题,也不用送去测序吧,直到条带在目的大小附近了再测序吧
4楼2015-11-03 21:45:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

18273176704

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 陈爱中 at 2015-11-03 22:17:43
marker看着有点糊啊,但是应该不是marker的问题,如果marker降解的的话应该是显示你的条带大于你的预期值。

这种情况我感觉可能是你的目标序列内部存在你的引物互补位点,建议你仔细检查一下。

引物只有三个连续碱基互补,应该没问题吧,用primer设计的时候,打分挺好的。。。我应该怎么检查啊
铭记那些不可回首。。。相信自己。。。
6楼2015-11-04 08:24:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

18273176704

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 咖啡豆G at 2015-11-03 21:45:42
重新做个温度梯度试试,条带不对应该不是marker的问题,也不用送去测序吧,直到条带在目的大小附近了再测序吧

重新做了。。还是在750那目的片段,,,,好崩溃。。好不容易p出来,,又不是的,我们师兄说可以拿去测测看是什么。
铭记那些不可回首。。。相信自己。。。
7楼2015-11-04 08:27:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaolu0713

新虫 (著名写手)

测序吧,有些马克实在是不敢恭维

发自小木虫Android客户端
9楼2015-11-04 09:49:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

18273176704

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by w_goodluck at 2015-11-04 08:31:40
的确可以测序看看 测序不贵 三四天出结果 能扩增出来单一条带 一般引物问题不会太大 如果说是引物可能和和内部序列匹配 那么多梯度温度扩增应该有的温度下出现两个条带 即使1300哪那个条带比较浅。建议测序后再分析 ...

这次的引物就是重新设计。刚回的啊。。。这基因快折磨死我了。之前设计了三队引物呢。之前就是也做了温度梯度。。可是一直是模糊条带要不就没带。。怎么增加循环数。改模板引物浓度都没用。。这次好不容条带亮了。又不是目的片段。。原因一直找不到。。
铭记那些不可回首。。。相信自己。。。
10楼2015-11-04 09:51:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 18273176704 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] FileCode能看出啥? +8 要乐观耀哥 2026-08-10 21/1050 2026-08-12 16:08 by 云上清扬
[基金申请] 长年满屏的广告,版主太不责任了。基金也等的急 +4 gltch 2026-08-12 4/200 2026-08-12 16:08 by eulota
[论文投稿] 职称评审,求友友推荐见刊最快的期刊 +4 工厂打螺丝 2026-08-08 4/200 2026-08-12 09:18 by hansi2025
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +7 布布和一二 2026-08-10 10/500 2026-08-12 09:12 by 布布和一二
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +3 yuleib84 2026-08-11 3/150 2026-08-11 21:53 by jnhyjjm
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +3 majunge000 2026-08-11 4/200 2026-08-11 20:13 by lch2012
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 听说今天filecode变了 +26 布布和一二 2026-08-06 49/2450 2026-08-11 13:18 by WH3796
[基金申请] 基金中了 +15 laoda193707 2026-08-06 15/750 2026-08-11 00:11 by jiafei2190
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 静等基金结果 +5 gjjjzhong 2026-08-10 16/800 2026-08-10 17:19 by Tide man
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +5 yang182083 2026-08-06 7/350 2026-08-08 18:29 by zhanghaozhu
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制,评价高的钱多评价低的钱少,但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
信息提示
请填处理意见