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寻香海棠新虫 (初入文坛)
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PCR就是不出目的条带！！！！已有1人参与
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我想做基因敲除，准备敲除的下游臂扩出来没有问题。 但是上游臂就是扩不出来。梯度PCR和降落PCR都试了，还是不行。引物设计的是60度的退火温度，软件是Omiga2.0. 引物也重新设计过了，向上增加了100bp左右，还是没有条带 用的菌株不是植物乳杆菌标准株，参考是WCFS1 诸位帮我分析一下！ |
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寻香海棠
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6楼2015-09-26 11:10:51
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2楼2015-09-25 23:20:19
寻香海棠
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3楼2015-09-25 23:25:52
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这个问题，我遇到过，我选择的第一个方案往往是设计温度梯度进行扩增，48-68度均试过，大部分能出来。但是还是有顽强的，如果结合引物的目的基因位置，自身不是很好和引物结合，判断结合好坏有G值决定的，不能偏低。会导致没有扩增条带，我们往往就是往外或者往里，从新设计引物。往往能批出条带。多设几个不同结合位点的引物，不差钱。 发自小木虫Android客户端 |
4楼2015-09-26 00:28:43