24小时热门版块排行榜    

查看: 1212  |  回复: 9
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

laraine40

金虫 (小有名气)

[求助] 小片段pcr求助

有一段452bp的基因,从质粒上p。之前p下来了,克隆也构建好了,但是表达不太好,所以最近打算重新构建一个克隆。然后换了引物之后,再也p不下来了。然后试着用之前的引物把这段基因p下来回收后做模板,还是不行。三步法做不出来,换了两步法,还是没用。上游引物63度,下游引物69.3度,从65到55拉了8个温度梯度,都没有。杂带多,目的条带看不到。确定引物设计没问题。求大神指导
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

laraine40

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 反应链 at 2015-09-22 18:34:06
模板质粒降解了吧。

质粒上的片段最好P了。

有没有重新提取质粒?

想办法找个阳性对照吧。

模板没问题呀,后来又用原来的引物p了一次,p的没问题,换到新的引物又不行了。我检查过了,新的引物设计没错
5楼2015-09-22 18:54:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

我欲乘风归去

木虫 (正式写手)

那这对引物在以前的质粒上P
2楼2015-09-22 17:51:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

反应链

新虫 (正式写手)

模板质粒降解了吧。

质粒上的片段最好P了。

有没有重新提取质粒?

想办法找个阳性对照吧。
3楼2015-09-22 18:34:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

laraine40

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 我欲乘风归去 at 2015-09-22 17:51:14
那这对引物在以前的质粒上P

p了,条带很亮,然后我回收了之后做模板,还是没p出来
4楼2015-09-22 18:52:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-14 18:36 by 正能量1斤
[基金申请] filecode +6 cratir 2026-08-14 10/500 2026-08-14 18:29 by 笑叹辞穷
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +6 majunge000 2026-08-11 8/400 2026-08-14 14:44 by 医学老男孩
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +23 Lanmanbaby 2026-08-09 37/1850 2026-08-14 13:40 by Equinoxhua
[基金申请] 好奇怪的filecode +6 布布和一二 2026-08-08 7/350 2026-08-14 13:38 by Equinoxhua
[论文投稿] 职称评审,求友友推荐见刊最快的期刊 +5 工厂打螺丝 2026-08-08 5/250 2026-08-14 11:03 by 玖戈弋
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +3 yuleib84 2026-08-11 3/150 2026-08-11 21:53 by jnhyjjm
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] fileCode有新解读? +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode,很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
信息提示
请填处理意见