24小时热门版块排行榜    

查看: 748  |  回复: 4

xiaozhou9959

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】有关PCR问题求助,谢谢。 已有3人参与

本人用菌体做模板P基因组中一段功能基因,开始采用退火温度50和52度,电泳都能出现目的大小条带,测序出现套峰。于是尝试提高退火温度以提高特异性,但扩增都失败了,再采用原来的条件也扩增不出目的片段,想请大家帮我分析一下原因(所用的酶,dNTP,buffer都是新的)。谢谢~~
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhenpeng84

铜虫 (小有名气)


lstt09nk(金币+1):欢迎多多交流~~ 2010-05-14 16:36:22
o        检查模板和引物的用量。
o        增加循环次数和/或模板DNA的用量
2楼2010-05-14 16:35:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bettyshan

木虫 (正式写手)

梦幻biobrick

xiaozhou9959(金币+3):谢谢~~ 2010-05-23 16:35:39
建议提基因组,以此为模板。
用菌体做模板有时候会出现菌裂解不开或不完全的状况。而且菌体洗涤过程中是否洗干净,培养基中残留的成分也会对PCR产生影响。还有就是检查一下水。
PCR过程要做阴性对照,便于查清原因。
祝顺利~~
我们都是芸芸众生的小人物,相遇相知,都是幸福!
3楼2010-05-14 16:40:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaozhou9959

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by zhenpeng84 at 2010-05-14 16:35:16:
o        检查模板和引物的用量。
o        增加循环次数和/或模板DNA的用量

谢谢,模板绝对是纯的,其他条件是我探索了好长时间确定的,应该都没有问题。
4楼2010-05-23 16:31:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaozhou9959

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by bettyshan at 2010-05-14 16:40:37:
建议提基因组,以此为模板。
用菌体做模板有时候会出现菌裂解不开或不完全的状况。而且菌体洗涤过程中是否洗干净,培养基中残留的成分也会对PCR产生影响。还有就是检查一下水。
PCR过程要做阴性对照,便于查清原 ...

谢谢,我每次做实验都做了阴性对照,用菌体做模板我都洗了两次,感觉你提基因组的建议很好。
5楼2010-05-23 16:35:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xiaozhou9959 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +18 医学老男孩 2026-08-13 41/2050 2026-08-14 12:34 by lqwchd
[基金申请] filecode +5 cratir 2026-08-14 9/450 2026-08-14 12:25 by 医学老男孩
[硕博家园] 请教兼职经验 +3 是阿文鸭 2026-08-09 3/150 2026-08-14 12:07 by HER12025
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +5 启萌科技 2026-08-12 13/650 2026-08-14 10:53 by lnjx2024
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +10 Tide man 2026-08-10 11/550 2026-08-14 10:30 by 沁言学术
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[文学芳草园] 阿姨 +4 汪汪锅 2026-08-09 4/200 2026-08-13 19:43 by arzu_hma
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +4 majunge000 2026-08-11 6/300 2026-08-13 16:50 by 四季常青藤
[基金申请] 好奇怪的filecode +5 布布和一二 2026-08-08 6/300 2026-08-12 16:11 by 云上清扬
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +7 布布和一二 2026-08-10 10/500 2026-08-12 09:12 by 布布和一二
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] fileCode有新解读? +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制,评价高的钱多评价低的钱少,但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变,有变的大神么? +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
信息提示
请填处理意见