应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】有关PCR问题求助，谢谢。
51/1返回列表
查看: 593  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

xiaozhou9959

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】有关PCR问题求助，谢谢。 已有3人参与

本人用菌体做模板P基因组中一段功能基因，开始采用退火温度50和52度，电泳都能出现目的大小条带，测序出现套峰。于是尝试提高退火温度以提高特异性，但扩增都失败了，再采用原来的条件也扩增不出目的片段，想请大家帮我分析一下原因（所用的酶，dNTP，buffer都是新的）。谢谢~~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-05-14 16:13:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhenpeng84

铜虫 (小有名气)
★
lstt09nk(金币+1):欢迎多多交流~~ 2010-05-14 16:36:22
o        检查模板和引物的用量。
o        增加循环次数和/或模板DNA的用量
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2010-05-14 16:35:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bettyshan

木虫 (正式写手)

梦幻biobrick
xiaozhou9959(金币+3):谢谢~~ 2010-05-23 16:35:39
建议提基因组，以此为模板。
用菌体做模板有时候会出现菌裂解不开或不完全的状况。而且菌体洗涤过程中是否洗干净，培养基中残留的成分也会对PCR产生影响。还有就是检查一下水。
PCR过程要做阴性对照，便于查清原因。
祝顺利~~
赞一下 回复此楼
我们都是芸芸众生的小人物，相遇相知，都是幸福！
3楼2010-05-14 16:40:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaozhou9959

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by zhenpeng84 at 2010-05-14 16:35:16:
o        检查模板和引物的用量。
o        增加循环次数和/或模板DNA的用量

谢谢，模板绝对是纯的，其他条件是我探索了好长时间确定的，应该都没有问题。
赞一下 回复此楼
4楼2010-05-23 16:31:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaozhou9959

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by bettyshan at 2010-05-14 16:40:37:
建议提基因组，以此为模板。
用菌体做模板有时候会出现菌裂解不开或不完全的状况。而且菌体洗涤过程中是否洗干净，培养基中残留的成分也会对PCR产生影响。还有就是检查一下水。
PCR过程要做阴性对照，便于查清原 ...

谢谢，我每次做实验都做了阴性对照，用菌体做模板我都洗了两次，感觉你提基因组的建议很好。
赞一下 回复此楼
5楼2010-05-23 16:35:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xiaozhou9959 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭