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chenyuqin

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】蛋白变异吗? 已有3人参与

大家好!
   我想请教一个有关蛋白表达的问题:
   本人构建了一个原核表达载体,经过IPTG诱导,SDS-PAGE后都正确的,但是一个月后再次用该菌诱导后发现蛋白质的分子量变大了,后经过PCR、酶切验证都也是正确的。不知道什么原因造成的,恳请各位大侠指教,谢谢啦!
   是核苷酸序列发生突变了吗?
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lwiaanngg

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你的分子量变大了多少?
重新用你构建好的质粒做一次转化,用新转化的表达菌株试一下吧
2楼2010-07-16 09:28:55
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chenyuqin

新虫 (小有名气)

谢谢!蛋白差不多大了10KDa,用原来构建好的质粒又重新做了一次转化,SDS-PAGE后还是有这个问题,不知道什么原因。
而且,我做的蛋白是有钙结合特性的,刚开始反应都是阳性的,后来也不行了。
恳请大侠赐教!谢谢啦!
where there is a will,there ia a way.
3楼2010-08-23 11:20:32
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jasco

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
如果表达菌,表达条件都没有变化的话,应该不会的啊,你的蛋白应该是多大?会形成2聚体么?。。。。

帮顶一下
4楼2010-08-23 13:03:20
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chenyuqin

新虫 (小有名气)

差不多33KDa,根据预测的结果,该蛋白本身就是二聚体,现在重新表达后跑胶显示43KDa左右,也没有钙结合活性了。不知道什么原因
where there is a will,there ia a way.
5楼2010-08-23 17:20:28
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