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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】蛋白变异吗？
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chenyuqin

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】蛋白变异吗？ 已有3人参与

大家好！
   我想请教一个有关蛋白表达的问题：
   本人构建了一个原核表达载体，经过IPTG诱导，SDS-PAGE后都正确的，但是一个月后再次用该菌诱导后发现蛋白质的分子量变大了，后经过PCR、酶切验证都也是正确的。不知道什么原因造成的，恳请各位大侠指教，谢谢啦！
   是核苷酸序列发生突变了吗？
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1楼 2010-07-15 21:52:21
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lwiaanngg

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你的分子量变大了多少？
重新用你构建好的质粒做一次转化，用新转化的表达菌株试一下吧
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2楼2010-07-16 09:28:55
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chenyuqin

新虫 (小有名气)
谢谢！蛋白差不多大了10KDa，用原来构建好的质粒又重新做了一次转化，SDS-PAGE后还是有这个问题，不知道什么原因。
而且，我做的蛋白是有钙结合特性的，刚开始反应都是阳性的，后来也不行了。
恳请大侠赐教！谢谢啦！
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3楼2010-08-23 11:20:32
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jasco

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
如果表达菌，表达条件都没有变化的话，应该不会的啊，你的蛋白应该是多大？会形成2聚体么？。。。。

帮顶一下
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4楼2010-08-23 13:03:20
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chenyuqin

新虫 (小有名气)
差不多33KDa,根据预测的结果，该蛋白本身就是二聚体，现在重新表达后跑胶显示43KDa左右，也没有钙结合活性了。不知道什么原因
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5楼2010-08-23 17:20:28
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