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小片段pcr求助
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| 有一段452bp的基因，从质粒上p。之前p下来了，克隆也构建好了，但是表达不太好，所以最近打算重新构建一个克隆。然后换了引物之后，再也p不下来了。然后试着用之前的引物把这段基因p下来回收后做模板，还是不行。三步法做不出来，换了两步法，还是没用。上游引物63度，下游引物69.3度，从65到55拉了8个温度梯度，都没有。杂带多，目的条带看不到。确定引物设计没问题。求大神指导 |
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