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boymin2010

金虫 (正式写手)

[求助] PCR求助~

最近遇到疑难问题如下，请教各位大虾~不甚感谢
我的部分实验步骤如下：酶切基因组后割胶回收500~1000bp的片段，加上22bp的接头后用这个接头进行pcr验证连接效果。
问题：1、序号为107和114的泳道怎么会出现300~500bp大小的pcr产物？
      2、割胶回收的酶切产物基本集中在1000bp左右，为什么pcr产物主要集中在500bp左右？
*makerTakara的DL505(100bp ladder),最亮的条带大小是500bp.
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1楼 2011-08-01 12:27:21
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taishanwei

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
boymin2010(金币+1): 2011-08-01 13:19:09
西瓜(金币+1): 鼓励交流 2011-08-01 16:53:10
上面那张说明你没有链接成功。重新连看看。
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2楼2011-08-01 13:12:40
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boymin2010

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by taishanwei at 2011-08-01 13:12:40:
上面那张说明你没有链接成功。重新连看看。

如果没有连接成功就P不出东西了，因为PCR引物就是接头哦~
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3楼2011-08-01 13:18:39
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taishanwei

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): 鼓励 2011-08-01 16:53:24
你可以做个对照，拿空载体对你的引物左看看，看是不是有一样的结果。如果链接上的话，结果会非常明显，会在1000bp的位置出现条带、
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4楼2011-08-01 13:24:54
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boymin2010

金虫 (正式写手)
你指的空载体是指没有接头的酶切片段么，没有接头就没有引物结合位点了哦，怎么p啊？
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5楼2011-08-01 13:31:41
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btx362237729

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

看起来像是在降解
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人生最黑暗的时光终于过去了
6楼2011-08-02 17:16:25
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boymin2010

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by btx362237729 at 2011-08-02 17:16:25:
看起来像是在降解

如果是降解的话，它就P不出来了啊。
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7楼2011-08-03 11:03:11
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xinyusinian

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): 鼓励交流 2011-08-03 22:25:04
boymin2010(金币+1): 2011-08-04 10:01:44
你割胶的时候确定500和500以下的分的很开吗？  
如果分的不开又割得不好，很容易出现杂带的，再仔细做一遍吧。
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8楼2011-08-03 12:27:41
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jbgdyy

木虫 (正式写手)
跑的很不好
二聚体比多啊
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9楼2011-08-03 19:54:59
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boymin2010

金虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by xinyusinian at 2011-08-03 12:27:41:
你割胶的时候确定500和500以下的分的很开吗？  
如果分的不开又割得不好，很容易出现杂带的，再仔细做一遍吧。

marker很清晰，割胶也很仔细~已经做了还几次了~
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10楼2011-08-04 10:00:06
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