24小时热门版块排行榜    

查看: 1277  |  回复: 15

boymin2010

金虫 (正式写手)

[求助] PCR求助~

最近遇到疑难问题如下,请教各位大虾~不甚感谢
我的部分实验步骤如下:酶切基因组后割胶回收500~1000bp的片段,加上22bp的接头后用这个接头进行pcr验证连接效果。
问题:1、序号为107和114的泳道怎么会出现300~500bp大小的pcr产物?
      2、割胶回收的酶切产物基本集中在1000bp左右,为什么pcr产物主要集中在500bp左右?
*makerTakara的DL505(100bp ladder),最亮的条带大小是500bp.


回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

taishanwei

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


boymin2010(金币+1): 2011-08-01 13:19:09
西瓜(金币+1): 鼓励交流 2011-08-01 16:53:10
上面那张说明你没有链接成功。重新连看看。
2楼2011-08-01 13:12:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

boymin2010

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by taishanwei at 2011-08-01 13:12:40:
上面那张说明你没有链接成功。重新连看看。

如果没有连接成功就P不出东西了,因为PCR引物就是接头哦~
3楼2011-08-01 13:18:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

taishanwei

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


西瓜(金币+1): 鼓励 2011-08-01 16:53:24
你可以做个对照,拿空载体对你的引物左看看,看是不是有一样的结果。如果链接上的话,结果会非常明显,会在1000bp的位置出现条带、
4楼2011-08-01 13:24:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

boymin2010

金虫 (正式写手)

你指的空载体是指没有接头的酶切片段么,没有接头就没有引物结合位点了哦,怎么p啊?
5楼2011-08-01 13:31:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

btx362237729

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

看起来像是在降解
人生最黑暗的时光终于过去了
6楼2011-08-02 17:16:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

boymin2010

金虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by btx362237729 at 2011-08-02 17:16:25:
看起来像是在降解

如果是降解的话,它就P不出来了啊。
7楼2011-08-03 11:03:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xinyusinian

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


西瓜(金币+1): 鼓励交流 2011-08-03 22:25:04
boymin2010(金币+1): 2011-08-04 10:01:44
你割胶的时候确定500和500以下的分的很开吗?  
如果分的不开又割得不好,很容易出现杂带的,再仔细做一遍吧。
8楼2011-08-03 12:27:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jbgdyy

木虫 (正式写手)

跑的很不好
二聚体比多啊
9楼2011-08-03 19:54:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

boymin2010

金虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by xinyusinian at 2011-08-03 12:27:41:
你割胶的时候确定500和500以下的分的很开吗?  
如果分的不开又割得不好,很容易出现杂带的,再仔细做一遍吧。

marker很清晰,割胶也很仔细~已经做了还几次了~
10楼2011-08-04 10:00:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 boymin2010 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +32 医学老男孩 2026-08-13 74/3700 2026-08-16 21:05 by 医学老男孩
[论文投稿] 岩土工程学报什么时候才能终审完呐 25+3 yeager111 2026-08-10 4/200 2026-08-16 20:42 by tfang
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +13 archvillain 2026-08-15 25/1250 2026-08-16 20:13 by zhaosm1982
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +3 Tide man 2026-08-14 3/150 2026-08-16 17:47 by jurkat.1640
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +9 Ldrop2023 2026-08-13 9/450 2026-08-16 13:24 by wukun_007
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +12 Tide man 2026-08-10 13/650 2026-08-15 16:34 by 氺木
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +10 majunge000 2026-08-10 13/650 2026-08-15 12:26 by hanpeng972
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
信息提示
请填处理意见