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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR扩增基因求助
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晶雪轩

铁虫 (初入文坛)

[求助] PCR扩增基因求助 已有4人参与

我扩增一个gDNA，做了好多次都成了下面这两个图这种类型只有拖尾没有条带，换了新的酶，换了新的引物，温度等设置及PCR仪我都使用和原先能够做出来的cDNA的PCR一样的，就是P不出来，求帮忙分析。

PCR扩增基因求助
2015-07-24gDNASUT2.png


PCR扩增基因求助-1
2015-07-26SUT2gDNA.png
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1楼 2015-07-31 14:58:35
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

mengzhuan319

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-08-22 23:05:24
1.预变性时间是不是太短，最长可延至10min
2.退火温度偏低，配对效率太低
3.引物稀释的时候建议用粗枪头混匀，防止引物断裂
4.留意体系中引物和DNA 的配比
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HIV检测试剂盒研发、细胞培养
3楼2015-08-22 22:10:24
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-08-27 23:00:14
你在cDNA中能扩出来，你知不知道gDNA中条带大小？出现这种情况估计是gDNA中有大的内含子在你的反应时间里扩增不出来。你可以用Longrange酶扩增一下，保证足够长的延伸时间。再一个你在cDNA分段设计一下引物分别扩一下看一下哪段出现问题。
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晶雪轩
hehe
8楼2015-08-27 20:13:19
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普通回帖

王小燕30

铜虫 (小有名气)
问LZ找到原因了吗
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2楼2015-08-22 10:36:25
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刘大大丹

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我P出来也是这样 好难过
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4楼2015-08-26 17:37:56
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acvhreinlg

银虫 (正式写手)
你提供的信息太少了

发自小木虫Android客户端
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科研是将金钱转换为知识的过程，而创新则是将知识转换为金钱的过程。
5楼2015-08-27 00:46:15
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暮笛薄阳

铜虫 (初入文坛)
★ ★ ★
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2015-08-27 23:00:02
这种情况大多是是引物和模板的问题：
1、点样孔处亮说明模板有污染
2、有微量拖带说明扩增出了非特异性条带
3、检查一下自己的引物，是否会形成引物间或引物自身的互补，或者形成发夹结构
4、退火温度可以设个梯度看看，模板的变性一定要彻底
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6楼2015-08-27 10:17:47
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jingmi

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

模板有问题。浓度太高或太低，要么降解

[ 发自小木虫客户端 ]
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7楼2015-08-27 19:40:49
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晶雪轩

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 王小燕30 at 2015-08-22 10:36:25
问LZ找到原因了吗

没有，后面试了很多种方法，p出来了但是浓度很低，2管50微的样都测不出序来。。。
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9楼2015-10-01 20:55:49
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晶雪轩

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by mengzhuan319 at 2015-08-22 22:10:24
1.预变性时间是不是太短，最长可延至10min
2.退火温度偏低，配对效率太低
3.引物稀释的时候建议用粗枪头混匀，防止引物断裂
4.留意体系中引物和DNA 的配比

哦哦，谢谢~我再试试
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10楼2015-10-01 20:57:00
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