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晶雪轩

铁虫 (初入文坛)

[求助] PCR扩增基因求助 已有4人参与

我扩增一个gDNA,做了好多次都成了下面这两个图这种类型只有拖尾没有条带,换了新的酶,换了新的引物,温度等设置及PCR仪我都使用和原先能够做出来的cDNA的PCR一样的,就是P不出来,求帮忙分析。

PCR扩增基因求助
2015-07-24gDNASUT2.png


PCR扩增基因求助-1
2015-07-26SUT2gDNA.png
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-08-27 23:00:14
你在cDNA中能扩出来,你知不知道gDNA中条带大小?出现这种情况估计是gDNA中有大的内含子在你的反应时间里扩增不出来。你可以用Longrange酶扩增一下,保证足够长的延伸时间。再一个你在cDNA分段设计一下引物分别扩一下看一下哪段出现问题。

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hehe
8楼2015-08-27 20:13:19
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王小燕30

铜虫 (小有名气)

问LZ找到原因了吗
2楼2015-08-22 10:36:25
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mengzhuan319

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-08-22 23:05:24
1.预变性时间是不是太短,最长可延至10min
2.退火温度偏低,配对效率太低
3.引物稀释的时候建议用粗枪头混匀,防止引物断裂
4.留意体系中引物和DNA 的配比
HIV检测试剂盒研发、细胞培养
3楼2015-08-22 22:10:24
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刘大大丹

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我P出来也是这样 好难过
4楼2015-08-26 17:37:56
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