应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR扩增基因求助
121/2返回列表12下一页
查看: 1590  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

晶雪轩

铁虫 (初入文坛)

[求助] PCR扩增基因求助 已有4人参与

我扩增一个gDNA，做了好多次都成了下面这两个图这种类型只有拖尾没有条带，换了新的酶，换了新的引物，温度等设置及PCR仪我都使用和原先能够做出来的cDNA的PCR一样的，就是P不出来，求帮忙分析。

PCR扩增基因求助
2015-07-24gDNASUT2.png


PCR扩增基因求助-1
2015-07-26SUT2gDNA.png
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-07-31 14:58:35
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

mengzhuan319

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-08-22 23:05:24
1.预变性时间是不是太短，最长可延至10min
2.退火温度偏低，配对效率太低
3.引物稀释的时候建议用粗枪头混匀，防止引物断裂
4.留意体系中引物和DNA 的配比
赞一下(1人) 回复此楼
HIV检测试剂盒研发、细胞培养
3楼2015-08-22 22:10:24
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-08-27 23:00:14
你在cDNA中能扩出来，你知不知道gDNA中条带大小？出现这种情况估计是gDNA中有大的内含子在你的反应时间里扩增不出来。你可以用Longrange酶扩增一下，保证足够长的延伸时间。再一个你在cDNA分段设计一下引物分别扩一下看一下哪段出现问题。
赞一下(1人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

晶雪轩
hehe
8楼2015-08-27 20:13:19
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

王小燕30

铜虫 (小有名气)
问LZ找到原因了吗
赞一下 回复此楼
2楼2015-08-22 10:36:25
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

刘大大丹

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我P出来也是这样 好难过
赞一下 回复此楼
4楼2015-08-26 17:37:56
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

acvhreinlg

银虫 (正式写手)
你提供的信息太少了

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
科研是将金钱转换为知识的过程，而创新则是将知识转换为金钱的过程。
5楼2015-08-27 00:46:15
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

暮笛薄阳

铜虫 (初入文坛)
★ ★ ★
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2015-08-27 23:00:02
这种情况大多是是引物和模板的问题：
1、点样孔处亮说明模板有污染
2、有微量拖带说明扩增出了非特异性条带
3、检查一下自己的引物，是否会形成引物间或引物自身的互补，或者形成发夹结构
4、退火温度可以设个梯度看看，模板的变性一定要彻底
赞一下 回复此楼
6楼2015-08-27 10:17:47
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jingmi

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

模板有问题。浓度太高或太低，要么降解

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
7楼2015-08-27 19:40:49
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

晶雪轩

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 王小燕30 at 2015-08-22 10:36:25
问LZ找到原因了吗

没有，后面试了很多种方法，p出来了但是浓度很低，2管50微的样都测不出序来。。。
赞一下 回复此楼
9楼2015-10-01 20:55:49
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

晶雪轩

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by mengzhuan319 at 2015-08-22 22:10:24
1.预变性时间是不是太短，最长可延至10min
2.退火温度偏低，配对效率太低
3.引物稀释的时候建议用粗枪头混匀，防止引物断裂
4.留意体系中引物和DNA 的配比

哦哦，谢谢~我再试试
赞一下 回复此楼
10楼2015-10-01 20:57:00
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 晶雪轩 的主题更新
121/2返回列表12下一页
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 关于代码变化问题，想知道的进来 +7 且听虎啸 2026-08-07 10/500 2026-08-07 20:43 by 医学老男孩
[基金申请] 基金中了 +13 laoda193707 2026-08-06 13/650 2026-08-07 20:33 by tchen18
[基金申请] 固定端突然变了，今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] 听说今天filecode变了 +24 布布和一二 2026-08-06 47/2350 2026-08-07 16:02 by zhiyanjiang
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[论文投稿] 十年后又回来了，论文投稿求助 +4 哈哈114477 2026-08-01 4/200 2026-08-07 14:39 by jgy194592
[基金申请] 大家散了吧，后缀研究没有意义，别浪费时间了，过好目前的每一天，不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +4 yang182083 2026-08-06 6/300 2026-08-07 12:43 by 虫友是什么虫
[基金申请] 面上再次挂了，太难了，躺也躺不了，倦也卷不过，小学校之殇！ +23 低垂的野花 2026-07-31 31/1550 2026-08-07 12:22 by speculiar
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 8月时间戳变的，举个手。玩一下，释放压力 +9 archvillain 2026-08-04 11/550 2026-08-05 20:06 by wlwhappy
[基金申请] 好消息？这个有何含义？？？ +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[考博] 【2027博士申请】纳米药物递送方向 20+3 13586093586 2026-08-03 4/200 2026-08-05 09:59 by lfy8008
[基金申请] 有没有H口的？有收到消息的吗？ +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
[基金申请] 纯娱乐，不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
[基金申请] 面上提前没消息，有中的吗 +14 archvillain 2026-08-02 18/900 2026-08-04 14:42 by archvillain
[基金申请] 娱乐 +4 Tide man 2026-08-03 4/200 2026-08-04 11:51 by wgch518
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭