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波波斯猫

新虫 (初入文坛)

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专业: 微生物资源与分类学

[求助] 单增李斯特核酸提取及PCR扩增灵敏已有1人参与

各位有做过单增李斯特DNA提取的吗，这种革兰氏阳性菌用什么方法提取效率比较高。
我原菌液计数后大约有109CFU/ml，用pbs梯度稀释成10-1到10-7，稀释后的菌液取1ml离心收集菌体后提取，再做PCR
发现只能加成到10-3的，那就意味着PCR灵敏度为106CFU/ml
和很多文献报道的几十个或几千个差距很大
我实在搞不明白是什么原因，我选择的基因是hlyA基因。
不知道是因为提取的问题，还是引物的为，求助ing

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1楼 2014-03-24 13:59:01

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pennchem

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管辖: 生物科学

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
波波斯猫(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-03-24 15:15:15

背景提供的不够，如果你想和报道的文献比较结果，那么就要尽可能的和文献的方法，材料，操作，计算一致才可以比较。
如果觉得是引物问题，用同样的模板，用你现在的引物和文献的引物做对照实验接可以知道原因，
如果觉得是提取的问题，那么用不同的方法提取，用同样的引物做对比实验，也可以知道原因。
Good Luck!