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扬帆远航!

新虫 (初入文坛)

[求助] Real-time PCR结果分析 已有3人参与

大家好:
      我在做一个基因OXA-23的Real-time PCR标准曲线,我的目的片段为116bp,扩增条件为    50℃ 2min,95℃ 15min,94℃ 15s  60℃ 1min  45cycles。得到如图所示扩增曲线结果,平台期过长,请大家帮忙分析一下原因。
谢谢!

Real-time PCR结果分析
Amplification Plot.jpg
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嫁给幸福!
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jiqinger

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
ct值过高,起峰比较晚。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

123456
2楼2015-07-08 16:31:06
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nonglong1

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
扬帆远航!: 金币+50 2015-07-09 09:00:23
这说明你的基因的表大量太低了,等倍稀释后浓度更低。ct值大于33基本上就不准了,建议加大模版量试试。
祝好运,求金币哈!
植物学
3楼2015-07-08 16:45:51
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安馨儿

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你的内参CT值多少呀?如果内参正常的话,可以证明你的反转没有问题,那么原因可能是:第一,检测的基因确实表达量偏低,可以尝试加大模板量;第二,引物设计的不好,这样的话就要换对引物看看了

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

成功需要1万小时
4楼2015-07-08 20:03:49
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扬帆远航!

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by 安馨儿 at 2015-07-08 20:03:49
你的内参CT值多少呀?如果内参正常的话,可以证明你的反转没有问题,那么原因可能是:第一,检测的基因确实表达量偏低,可以尝试加大模板量;第二,引物设计的不好,这样的话就要换对引物看看了

谢谢!我换下引物再试试
嫁给幸福!
5楼2015-07-09 09:02:17
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扬帆远航!

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by jiqinger at 2015-07-08 16:31:06
ct值过高,起峰比较晚。

对的!
嫁给幸福!
6楼2015-07-09 09:02:51
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