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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » Real-time PCR结果分析
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扬帆远航！

新虫 (初入文坛)

[求助] Real-time PCR结果分析 已有3人参与

大家好：
      我在做一个基因OXA-23的Real-time PCR标准曲线，我的目的片段为116bp，扩增条件为    50℃ 2min，95℃ 15min，94℃ 15s  60℃ 1min  45cycles。得到如图所示扩增曲线结果，平台期过长，请大家帮忙分析一下原因。
谢谢！

Real-time PCR结果分析
Amplification Plot.jpg
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嫁给幸福！
1楼 2015-07-08 09:00:35
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jiqinger

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
ct值过高，起峰比较晚。
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扬帆远航！
123456
2楼2015-07-08 16:31:06
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nonglong1

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
扬帆远航！: 金币+50 2015-07-09 09:00:23
这说明你的基因的表大量太低了，等倍稀释后浓度更低。ct值大于33基本上就不准了，建议加大模版量试试。
祝好运，求金币哈！
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植物学
3楼2015-07-08 16:45:51
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安馨儿

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的内参CT值多少呀？如果内参正常的话，可以证明你的反转没有问题，那么原因可能是：第一，检测的基因确实表达量偏低，可以尝试加大模板量；第二，引物设计的不好，这样的话就要换对引物看看了
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扬帆远航！
成功需要1万小时
4楼2015-07-08 20:03:49
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扬帆远航！

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by 安馨儿 at 2015-07-08 20:03:49
你的内参CT值多少呀？如果内参正常的话，可以证明你的反转没有问题，那么原因可能是：第一，检测的基因确实表达量偏低，可以尝试加大模板量；第二，引物设计的不好，这样的话就要换对引物看看了

谢谢！我换下引物再试试
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嫁给幸福！
5楼2015-07-09 09:02:17
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扬帆远航！

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by jiqinger at 2015-07-08 16:31:06
ct值过高，起峰比较晚。

对的！
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嫁给幸福！
6楼2015-07-09 09:02:51
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