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wangying0923

金虫 (小有名气)

[求助] 细菌基因组测序产生的scaffold怎么分析 已有4人参与

在公司测序回来的细菌基因组数据有19个scaffold,这些scaffold该怎么分析,能用什么软件将它们拼起来吗,还是有gap不能拼接,因为我想获得它的全基因序列,这个scaffold这么多,是不是要补gap,要是补的话该怎么补,问题有点多,在这方面是新手,求解求解!
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happy6

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wangying0923: 金币+3, 有帮助 2015-06-19 08:56:49
测序公司给你的是拼接好的序列,scaffold中间是有gap的,如果可以拼接成完整的序列,测序公司就可以拼接了,最终是要用一代测序的方法去补gap,或者是加入三代测序的数据,重新拼接才有可能得到细菌基因组的全序列。不同的scaffold之间的关系,可以参考已经释放的细菌基因组序列,设计引物进行PCR扩增,之后进行一代测序,从而得到全基因组序列。
6楼2015-06-18 09:14:41
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happy6

木虫 (著名写手)

你们老板是想省钱啊,让你做补gap的工作,这个工作还是很耗人力的。如果说单纯用测序的read再去组装,那未免太简单了些啦,(当然,二代测序+三代测序数据,一起拼接的除外)哈哈。那样做细菌基因组完成图岂不是很简单了?办法两个:1、一代测序补洞;2、加入三代测序数据,升级成完成图。祝好运哦!
7楼2015-06-18 09:19:36
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great07225388

新虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
wangying0923: 金币+3 2015-07-15 08:26:48
看来你们老板确实是想省钱,拿做扫描图或者精细图的钱,想干完成图的事。想利用之前的reads来补洞,基本上是不可实现的,除非重新测序产生新的数据。楼上列举了几种补洞的方法,都是可行的,但是这些工作都得交给公司去做。楼主自己想补洞,难度太大了。精细图距离完成图,距离还是非常大的。

[ 发自小木虫客户端 ]
11楼2015-07-14 10:03:30
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tian150685

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我的细菌基因组测序也是公司给了几个scaffold,中间有3个gap需要补,由于gap的大小较小,我是采用PCR拼接的,但是遇到了问题,拼接出来以后的片段大小和我需要补得gap大小不对,正在送去测序,你的gap问题解决了吗?
18楼2015-11-09 15:44:03
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普通回帖

fenghan06

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wangying0923: 金币+5, 有帮助 2015-06-17 10:49:26
你可以再做一轮illumina看能不能合上, 还不行, 就只能靠walking了. 有reference genome吗,那样子做PCR walking就不需要使用inverse PCR.
2楼2015-06-17 10:20:38
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wangying0923

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by fenghan06 at 2015-06-17 10:20:38
你可以再做一轮illumina看能不能合上, 还不行, 就只能靠walking了. 有reference genome吗,那样子做PCR walking就不需要使用inverse PCR.

谢谢建议,老板的意思让我利用reads自己再拼接,说肯定有还没利用上的reads,再补gap,觉得难度有毫大,又不会,reads太多,都不知道该怎么办了,唉
3楼2015-06-17 10:54:08
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fenghan06

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by wangying0923 at 2015-06-17 10:54:08
谢谢建议,老板的意思让我利用reads自己再拼接,说肯定有还没利用上的reads,再补gap,觉得难度有毫大,又不会,reads太多,都不知道该怎么办了,唉...

可以尝试, 不过就算你的reads有能够利用的,还得看运算难度了。 你用自己电脑跑的程序?
你做的是de novo组合? 没有reference可以map吗?
4楼2015-06-17 11:23:29
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wangying0923

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by fenghan06 at 2015-06-17 11:23:29
可以尝试, 不过就算你的reads有能够利用的,还得看运算难度了。 你用自己电脑跑的程序?
你做的是de novo组合? 没有reference可以map吗?...

不是用自己的电脑,我做的那个细菌基因组序列NCBI已经释放了,可以借助参考,请问你有这方面的经验吗
5楼2015-06-17 14:51:10
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fenghan06

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
wangying0923: 金币+5 2015-06-19 09:01:10
你们那些contig是测序公司帮你拼的? 如果那样子的话就没自己继续拼接的理由了。 你可以使用已有的基因组拼图看大致上还有多大的空缺, 如果小的话可以使用PCR拼接, 大的话, 就再做一轮测序吧。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
8楼2015-06-18 11:16:01
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wangying0923

金虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by happy6 at 2015-06-18 09:19:36
你们老板是想省钱啊,让你做补gap的工作,这个工作还是很耗人力的。如果说单纯用测序的read再去组装,那未免太简单了些啦,(当然,二代测序+三代测序数据,一起拼接的除外)哈哈。那样做细菌基因组完成图岂不是很简 ...

谢谢啊,嗯,很有难度的感觉,我自己肯定搞不定,到时直接跟老板说吧
9楼2015-06-19 08:58:46
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wangying0923

金虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by fenghan06 at 2015-06-18 11:16:01
你们那些contig是测序公司帮你拼的? 如果那样子的话就没自己继续拼接的理由了。 你可以使用已有的基因组拼图看大致上还有多大的空缺, 如果小的话可以使用PCR拼接, 大的话, 就再做一轮测序吧。
...

是公司拼接的,现在连个圈形都没看到,就十几个scaffold,scaffold之间顺序都不知道,老板还让我搞定,太高看我了吧,公司都搞不定,唉。。。
10楼2015-06-19 09:05:07
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