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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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qaz139687

新虫 (小有名气)

[求助] 我要扩一个基因的ORF框 已有1人参与

上引物跟下引物设计有什么要求,上引物是不是就从ORF的起始密码子开始,还是可以稍微往前一点加点5-UTR区的碱基,下引物是不是就到终止密码子,还是可以到3-UTR区的碱基
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ksws0465326

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这要具体看你拿这段ORF干嘛了,如果只是想验证片段大小,引物就没啥要求,你说的两种都可以,如果你要是想将这段ORF扩到载体里,就要具体看你的载体是啥,插入到什么位置,用酶切链接还是self ligation还是什么,还要看你这段基因接下来还要做什么,做蛋白表达还是什么的,做表达是否要链接tag标签,是否要做荧光表达,还是什么,考虑的多了,设计的引物就不同
2楼2015-06-12 15:12:58
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qaz139687

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by ksws0465326 at 2015-06-12 15:12:58
这要具体看你拿这段ORF干嘛了,如果只是想验证片段大小,引物就没啥要求,你说的两种都可以,如果你要是想将这段ORF扩到载体里,就要具体看你的载体是啥,插入到什么位置,用酶切链接还是self ligation还是什么,还 ...

扩到载体里面,合成探针用的,合成探针是不是一定要整个ORF,或者只是ORF框序列的一段几百bp大小就可以了
3楼2015-06-14 13:43:01
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ksws0465326

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
qaz139687: 金币+3, 有帮助 2015-06-16 19:44:44
探针,不是太熟悉,是要做southern blotting吗?如果是,个人觉得全段,或是p几百都可以,最好p全段,反正方法都是一样的,全段还可以防止以后其他实验会用到。。。
4楼2015-06-15 12:59:06
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qaz139687

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by ksws0465326 at 2015-06-15 12:59:06
探针,不是太熟悉,是要做southern blotting吗?如果是,个人觉得全段,或是p几百都可以,最好p全段,反正方法都是一样的,全段还可以防止以后其他实验会用到。。。

不是,就是普通的原位杂交,看网上有些人说全长的话容易降解,不建议用全长,只要500bp以下的,不知道要在用哪部分片段,有么有什么要求
5楼2015-06-16 11:39:05
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ksws0465326

金虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by qaz139687 at 2015-06-16 11:39:05
不是,就是普通的原位杂交,看网上有些人说全长的话容易降解,不建议用全长,只要500bp以下的,不知道要在用哪部分片段,有么有什么要求...

原位杂交。。。不好意思没接触过,不熟悉,无法给出意见了
6楼2015-06-16 18:30:57
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海边闲散人

新虫 (小有名气)

楼主,你最后拿到orf全长了吗?

发自小木虫Android客户端
7楼2018-01-15 22:11:55
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