应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 我要扩一个基因的ORF框
71/1返回列表
查看: 1396  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

qaz139687

新虫 (小有名气)

[求助] 我要扩一个基因的ORF框 已有1人参与

上引物跟下引物设计有什么要求，上引物是不是就从ORF的起始密码子开始，还是可以稍微往前一点加点5-UTR区的碱基，下引物是不是就到终止密码子，还是可以到3-UTR区的碱基
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-06-12 14:40:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ksws0465326

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这要具体看你拿这段ORF干嘛了，如果只是想验证片段大小，引物就没啥要求，你说的两种都可以，如果你要是想将这段ORF扩到载体里，就要具体看你的载体是啥，插入到什么位置，用酶切链接还是self ligation还是什么，还要看你这段基因接下来还要做什么，做蛋白表达还是什么的，做表达是否要链接tag标签，是否要做荧光表达，还是什么，考虑的多了，设计的引物就不同
赞一下 回复此楼
2楼2015-06-12 15:12:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qaz139687

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ksws0465326 at 2015-06-12 15:12:58
这要具体看你拿这段ORF干嘛了，如果只是想验证片段大小，引物就没啥要求，你说的两种都可以，如果你要是想将这段ORF扩到载体里，就要具体看你的载体是啥，插入到什么位置，用酶切链接还是self ligation还是什么，还 ...

扩到载体里面，合成探针用的，合成探针是不是一定要整个ORF，或者只是ORF框序列的一段几百bp大小就可以了
赞一下 回复此楼
3楼2015-06-14 13:43:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ksws0465326

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
qaz139687: 金币+3, ★有帮助 2015-06-16 19:44:44
探针，不是太熟悉，是要做southern blotting吗？如果是，个人觉得全段，或是p几百都可以，最好p全段，反正方法都是一样的，全段还可以防止以后其他实验会用到。。。
赞一下 回复此楼
4楼2015-06-15 12:59:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qaz139687

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by ksws0465326 at 2015-06-15 12:59:06
探针，不是太熟悉，是要做southern blotting吗？如果是，个人觉得全段，或是p几百都可以，最好p全段，反正方法都是一样的，全段还可以防止以后其他实验会用到。。。

不是，就是普通的原位杂交，看网上有些人说全长的话容易降解，不建议用全长，只要500bp以下的，不知道要在用哪部分片段，有么有什么要求
赞一下 回复此楼
5楼2015-06-16 11:39:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ksws0465326

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by qaz139687 at 2015-06-16 11:39:05
不是，就是普通的原位杂交，看网上有些人说全长的话容易降解，不建议用全长，只要500bp以下的，不知道要在用哪部分片段，有么有什么要求...

原位杂交。。。不好意思没接触过，不熟悉，无法给出意见了
赞一下 回复此楼
6楼2015-06-16 18:30:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

海边闲散人

新虫 (小有名气)
楼主，你最后拿到orf全长了吗？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
7楼2018-01-15 22:11:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 qaz139687 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭