24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 2349  |  回复: 8

tinychan

新虫 (初入文坛)

[求助] 基因组DNA做模板扩增目的片段比cDND扩增得到的短 已有1人参与

请问各位大神有没有用基因组DNA做PCR的呀?我根据目的基因ORF进行引物设计,分别以cDNA和gDNA为模板进行扩增,发现cDNA扩增得到的片段居然比gDNA得到的片段还长,这是什么原因呀?我的实验目的主要是通过基因组DNA扩增查看目的基因的内含子和外显子分布情况,但没想到换了几次引物都得到这样的结果,现在不知道该怎么办,请各位大神指教啊~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
基因组为模板的扩增产物测序了吗?也许只是个非目标片段
2楼2014-11-05 22:10:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tinychan

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2014-11-05 22:10:57
基因组为模板的扩增产物测序了吗?也许只是个非目标片段

没有测序,我们做的是植物,没有基因组,该怎么设计引物才能提高特异性呀?请指教
3楼2014-11-06 14:58:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by tinychan at 2014-11-06 14:58:54
没有测序,我们做的是植物,没有基因组,该怎么设计引物才能提高特异性呀?请指教...

我的意思是你扩增出的产物测序了吗?比对一下,才能知道扩出的是不是你的目标序列。
4楼2014-11-06 17:45:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tinychan

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by stone2239 at 2014-11-06 17:45:43
我的意思是你扩增出的产物测序了吗?比对一下,才能知道扩出的是不是你的目标序列。...

哦,我明白。只是我还想请教一下有没有较好的方法可以通过基因ORF设计引物得到基因组序列,或者说有没有方法可以得到我基因外显子/内含子剪切位置?
5楼2014-11-06 21:12:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by tinychan at 2014-11-06 21:12:13
哦,我明白。只是我还想请教一下有没有较好的方法可以通过基因ORF设计引物得到基因组序列,或者说有没有方法可以得到我基因外显子/内含子剪切位置?...

你明白,倒是说呀,你测序没有?结果如何?一般通过查资料就可知道该基因是否含内含子。实验方法都是用你这样的方法,这就是最简单的方法了。

[ 发自小木虫客户端 ]
6楼2014-11-06 22:54:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tinychan

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by stone2239 at 2014-11-06 22:54:03
你明白,倒是说呀,你测序没有?结果如何?一般通过查资料就可知道该基因是否含内含子。实验方法都是用你这样的方法,这就是最简单的方法了。
...

我们没有测序,做的植物的基因,还有基因组的。我是想知道有没有别的办法可以查到内含子/外显子分布情况的?
7楼2014-11-07 14:11:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tinychan

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by stone2239 at 2014-11-06 22:54:03
你明白,倒是说呀,你测序没有?结果如何?一般通过查资料就可知道该基因是否含内含子。实验方法都是用你这样的方法,这就是最简单的方法了。
...

不好意思,说错了,是没有基因组序列。
8楼2014-11-07 14:32:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by tinychan at 2014-11-07 14:32:07
不好意思,说错了,是没有基因组序列。...

我的意思是你把你自己用基因组为模板的扩增结果拿去测序,同时也把你用mRNA反转录的cDNA为模板的扩增结果也拿去测序,然后比较两种方法扩增的片段,可以判断你的基因有无内含子,或者判断你的扩增结果是否正确。
你的基因应该有同源基因吧,看看拟南芥的对应的同源基因有无内含子,也可以初步推测你的基因有无内含子。
9楼2014-11-07 19:01:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 tinychan 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 265求调剂 +3 小木虫085600 2026-04-06 3/150 2026-04-06 13:06 by 无际的草原
[考研] 求调剂 +11 xzghyuj 2026-04-04 11/550 2026-04-06 11:49 by lijunpoly
[考研] 308求调剂 +12 倘若起风了呢 2026-04-05 12/600 2026-04-06 10:42 by lqwchd
[考研] 292求调剂 +3 lilllllxccc 2026-04-05 4/200 2026-04-06 10:39 by 蓝云思雨
[考研] 调剂 一志愿吉林大学357分 +5 .Starry. 2026-04-04 5/250 2026-04-06 09:28 by cql1109
[考研] 086000生物与医药298调剂求助 +9 元元青青 2026-03-31 12/600 2026-04-05 21:03 by 学员8dgXkO
[考研] 材料调剂 +13 一样YWY 2026-04-03 14/700 2026-04-05 18:20 by 蓝云思雨
[考研] 一志愿上海海洋大学083200食品学硕,求调剂,接受其他专业083200 +4 what张 2026-04-04 5/250 2026-04-05 14:07 by chw1980_0
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +4 崔wj 2026-04-04 5/250 2026-04-05 14:06 by imissbao
[考研] 083200 333求调剂 +3 十二!! 2026-04-04 3/150 2026-04-05 08:28 by barlinike
[考研] 材料与化工306分找调剂 +12 沧海轻舟e 2026-04-03 13/650 2026-04-04 23:45 by lqwchd
[考研] 一志愿南农090401,268,求调剂 +5 一木鸟然 2026-04-04 5/250 2026-04-04 17:07 by babysonlkd
[考研] 357求调剂 +13 1050389037 2026-04-03 13/650 2026-04-03 22:27 by 无际的草原
[考研] 335求调剂 +7 沈清璃 2026-04-03 7/350 2026-04-03 18:55 by lijunpoly
[考研] 334求调剂 +9 Trying] 2026-03-31 9/450 2026-04-03 15:18 by 琢珥丶
[考研] 工科 267求调剂 +5 wanwan00 2026-04-02 7/350 2026-04-03 14:14 by zhangdingwa
[考研] 求调剂 +3 心想事成可 2026-04-03 3/150 2026-04-03 11:22 by wangjy2002
[考研] 295求调剂 +7 愿旅途永远坦然 2026-04-02 7/350 2026-04-03 08:22 by fangshan711
[考研] 环境工程297分求调剂一志愿杭高院 +15 GENJIOW 2026-03-31 16/800 2026-04-02 17:56 by cyh—315
[考研] 0856初试324分求调剂 +6 想上学求调 2026-04-01 6/300 2026-04-02 11:42 by 星空星月
信息提示
请填处理意见