应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 基因组DNA做模板扩增目的片段比cDND扩增得到的短
91/1返回列表
查看: 2498  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

tinychan

新虫 (初入文坛)

[求助] 基因组DNA做模板扩增目的片段比cDND扩增得到的短 已有1人参与

请问各位大神有没有用基因组DNA做PCR的呀？我根据目的基因ORF进行引物设计，分别以cDNA和gDNA为模板进行扩增，发现cDNA扩增得到的片段居然比gDNA得到的片段还长，这是什么原因呀？我的实验目的主要是通过基因组DNA扩增查看目的基因的内含子和外显子分布情况,但没想到换了几次引物都得到这样的结果，现在不知道该怎么办，请各位大神指教啊~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-11-05 22:08:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
基因组为模板的扩增产物测序了吗？也许只是个非目标片段
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2014-11-05 22:10:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tinychan

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2014-11-05 22:10:57
基因组为模板的扩增产物测序了吗？也许只是个非目标片段

没有测序，我们做的是植物，没有基因组，该怎么设计引物才能提高特异性呀？请指教
赞一下 回复此楼
3楼2014-11-06 14:58:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by tinychan at 2014-11-06 14:58:54
没有测序，我们做的是植物，没有基因组，该怎么设计引物才能提高特异性呀？请指教...

我的意思是你扩增出的产物测序了吗？比对一下，才能知道扩出的是不是你的目标序列。
赞一下 回复此楼
4楼2014-11-06 17:45:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tinychan

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by stone2239 at 2014-11-06 17:45:43
我的意思是你扩增出的产物测序了吗？比对一下，才能知道扩出的是不是你的目标序列。...

哦，我明白。只是我还想请教一下有没有较好的方法可以通过基因ORF设计引物得到基因组序列，或者说有没有方法可以得到我基因外显子/内含子剪切位置？
赞一下 回复此楼
5楼2014-11-06 21:12:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by tinychan at 2014-11-06 21:12:13
哦，我明白。只是我还想请教一下有没有较好的方法可以通过基因ORF设计引物得到基因组序列，或者说有没有方法可以得到我基因外显子/内含子剪切位置？...

你明白，倒是说呀，你测序没有？结果如何？一般通过查资料就可知道该基因是否含内含子。实验方法都是用你这样的方法，这就是最简单的方法了。

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
6楼2014-11-06 22:54:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tinychan

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by stone2239 at 2014-11-06 22:54:03
你明白，倒是说呀，你测序没有？结果如何？一般通过查资料就可知道该基因是否含内含子。实验方法都是用你这样的方法，这就是最简单的方法了。
...

我们没有测序，做的植物的基因，还有基因组的。我是想知道有没有别的办法可以查到内含子/外显子分布情况的？
赞一下 回复此楼
7楼2014-11-07 14:11:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tinychan

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by stone2239 at 2014-11-06 22:54:03
你明白，倒是说呀，你测序没有？结果如何？一般通过查资料就可知道该基因是否含内含子。实验方法都是用你这样的方法，这就是最简单的方法了。
...

不好意思，说错了，是没有基因组序列。
赞一下 回复此楼
8楼2014-11-07 14:32:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by tinychan at 2014-11-07 14:32:07
不好意思，说错了，是没有基因组序列。...

我的意思是你把你自己用基因组为模板的扩增结果拿去测序，同时也把你用mRNA反转录的cDNA为模板的扩增结果也拿去测序，然后比较两种方法扩增的片段，可以判断你的基因有无内含子，或者判断你的扩增结果是否正确。
你的基因应该有同源基因吧，看看拟南芥的对应的同源基因有无内含子，也可以初步推测你的基因有无内含子。
赞一下 回复此楼
9楼2014-11-07 19:01:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 tinychan 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 jRl3mE6ddZGq 2026-08-03 8/400 2026-08-04 06:17 by k7OM8YghWbkC
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 jRl3mE6ddZGq 2026-08-03 8/400 2026-08-04 06:15 by k7OM8YghWbkC
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 6/300 2026-08-04 06:10 by k7OM8YghWbkC
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 9/450 2026-08-04 06:07 by k7OM8YghWbkC
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 jRl3mE6ddZGq 2026-08-03 4/200 2026-08-04 04:54 by k7OM8YghWbkC
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 jRl3mE6ddZGq 2026-08-03 6/300 2026-08-04 04:47 by k7OM8YghWbkC
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 8/400 2026-08-04 04:47 by k7OM8YghWbkC
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 8/400 2026-08-04 04:46 by k7OM8YghWbkC
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 12/600 2026-08-04 03:17 by k7OM8YghWbkC
[基金申请] 什么时候能放榜呀？ +3 Jacob678 2026-08-03 3/150 2026-08-03 16:14 by gltch
[高分子] UV压敏胶开发 +3 ichall 2026-07-30 5/250 2026-08-03 14:40 by Sunrisepay
[基金申请] 面上提前没消息，有中的吗 +14 archvillain 2026-08-02 16/800 2026-08-03 12:23 by fuweiguochen
[基金申请] 面上再次挂了，太难了，躺也躺不了，倦也卷不过，小学校之殇！ +19 低垂的野花 2026-07-31 25/1250 2026-08-03 09:25 by gy116024
[基金申请] 2026年国自然面上资助率 +16 布布和一二 2026-07-30 22/1100 2026-08-03 09:20 by gy116024
[教师之家] 基础研究怎么拉横向，学校到款任务越来越多，难以完成 拉横向，都有哪些途径啊 +8 锦衣卫寒战 2026-07-28 12/600 2026-08-03 08:22 by syl200707
[基金申请] 微信指数没变化，科研之友没阅读 +15 wangze12014 2026-07-28 19/950 2026-08-02 20:05 by 蔡棒棒菂
[考博] 2027年申博 50+3 射雕英雄胜 2026-07-30 3/150 2026-08-02 09:36 by lfy8008
[高分子] HXDI做水性聚氨酯乳液，是不是特别容易出渣 15+3 yuyusuv 2026-07-29 3/150 2026-07-31 09:21 by huizingga
[基金申请] 系统今天又提示维护了，估计离放榜不远了 +11 winnerche 2026-07-29 15/750 2026-07-30 23:08 by jnhyjjm
[基金申请] 你们的时间戳变了吗 +3 archvillain 2026-07-30 4/200 2026-07-30 18:53 by levinzhwen
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭