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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 基因组DNA做模板扩增目的片段比cDND扩增得到的短
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tinychan

新虫 (初入文坛)

[求助] 基因组DNA做模板扩增目的片段比cDND扩增得到的短 已有1人参与

请问各位大神有没有用基因组DNA做PCR的呀？我根据目的基因ORF进行引物设计，分别以cDNA和gDNA为模板进行扩增，发现cDNA扩增得到的片段居然比gDNA得到的片段还长，这是什么原因呀？我的实验目的主要是通过基因组DNA扩增查看目的基因的内含子和外显子分布情况,但没想到换了几次引物都得到这样的结果，现在不知道该怎么办，请各位大神指教啊~
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1楼 2014-11-05 22:08:42
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tinychan

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by stone2239 at 2014-11-06 17:45:43
我的意思是你扩增出的产物测序了吗？比对一下，才能知道扩出的是不是你的目标序列。...

哦，我明白。只是我还想请教一下有没有较好的方法可以通过基因ORF设计引物得到基因组序列，或者说有没有方法可以得到我基因外显子/内含子剪切位置？
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5楼2014-11-06 21:12:13
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)
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基因组为模板的扩增产物测序了吗？也许只是个非目标片段
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2楼2014-11-05 22:10:57
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tinychan

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2014-11-05 22:10:57
基因组为模板的扩增产物测序了吗？也许只是个非目标片段

没有测序，我们做的是植物，没有基因组，该怎么设计引物才能提高特异性呀？请指教
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3楼2014-11-06 14:58:54
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by tinychan at 2014-11-06 14:58:54
没有测序，我们做的是植物，没有基因组，该怎么设计引物才能提高特异性呀？请指教...

我的意思是你扩增出的产物测序了吗？比对一下，才能知道扩出的是不是你的目标序列。
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4楼2014-11-06 17:45:43
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