| 查看: 2853 | 回复: 6 | ||
奇怪人生123银虫 (小有名气)
|
[求助]
求助！基因ORF与终止子的连接问题 已有4人参与
|
|
各位大神，本菜鸟要构建一个质粒，骨架是pMCB17apx。 质粒上面有alcA启动子，后面紧跟一个gfp基因，我改造时，就在gfp后的合适位置，连接上了我的目的基因的完整ORF，但是现在缺少终止子。 虽然手头有trpC基因的终止子可用，但是导师交代连接终止子的时候需要注意的点有不少，我现在也很不清楚，不敢贸然直接去，有哪些大神能指点迷津啊？ 比如，用酶切的方法将终止子连接到目的基因后面，但是之间肯定会有几个无关的碱基（酶切位点），这有关系吗？导师指导说，目的基因和终止子之间，碱基数较多肯定不好，但是太少也会影响发挥作用，是否属实啊？求指点！！！ |
回复此楼» 猜你喜欢
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有200人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
317分 一志愿江南大学 化学工程学硕 求调剂
已经有6人回复
-
化工申博
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 求助在载体构建过程中，信号肽与GFP的引物设计、启动子切除以及读码框的问题
已经有3人回复
- 获得一段碱基序列，应该是个未知基因，如何确定起始密码子和终止密码子
已经有3人回复
- PCR引物必须与目的基因片段的一小段序列互补吗？急！！！
已经有9人回复
- 求高手帮忙看看这个质粒图谱！我目的基因的启动子和终止子各是什么喃？
已经有12人回复
- 只知道基因CDS区序列，如何扩增该基因的启动子
已经有11人回复
- 宏基因组的ORF预测
已经有10人回复
- 全长基因表达，关于酶切位点，关于ORF
已经有10人回复
- 已知序列，什么软件可以分析出启动子和终止子
已经有6人回复
- 酿酒酵母的ORF与启动子、终止子
已经有10人回复
- 酿酒酵母基因敲除实验顺利需多少时间
已经有22人回复
- 【求助】用cDNA的ORF序列以基因组DNA为模板 做PCR 为何P不出其对应的基因组序列?
已经有8人回复
- 连有启动子、基因、终止子的一整段叫什么
已经有26人回复
- 如何寻找基因的启动子和终止子？
已经有3人回复
- 如何i确定基因的启动子和终止子
已经有4人回复
- 【求助/交流】怎样查找一个基因的启动子？？
已经有7人回复
- 【求助/交流】为什么我反转录PCR的抗体的轻链基因测序后发现总是有终止子？
已经有6人回复
- 【分享】启动子和终止子的在线预测
已经有10人回复
- 引物设计求助~
已经有13人回复
Neo2000
木虫 (著名写手)
- 应助: 639 (博士)
- 金币: 8720.2
- 红花: 37
- 帖子: 1700
- 在线: 269.3小时
- 虫号: 322365
- 注册: 2007-03-11
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
2楼2014-05-29 16:23:16
奇怪人生123
银虫 (小有名气)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 457.4
- 帖子: 73
- 在线: 86.6小时
- 虫号: 1037447
- 注册: 2010-06-07
- 性别: GG
- 专业: 临床分子生物学检验
3楼2014-05-29 21:06:01
4楼2014-05-30 15:31:12
鬼羽帝魂
木虫 (著名写手)
- 应助: 183 (高中生)
- 金币: 3100.2
- 散金: 19
- 红花: 12
- 帖子: 1427
- 在线: 186.8小时
- 虫号: 2538789
- 注册: 2013-07-09
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
5楼2014-08-21 17:11:31
dynamicren
木虫 (著名写手)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 3813.3
- 散金: 12
- 红花: 3
- 帖子: 1222
- 在线: 424小时
- 虫号: 234659
- 注册: 2006-03-31
- 性别: GG
- 专业: 水产养殖学
【答案】应助回帖
|
看了不少回复，感觉都没太说到点子上。 你导师的提醒是对的，终止子和ORF之间的碱基个数是会影响到终止子的终止效率的，其理论基础便是翻译时核糖体（ribosome）在mRNA上如果和终止子形成的茎环结构（Stem-loop）太近的话会干扰茎环的形成从而造成通读（readthrough），太远的话由于转录惯性也会造成终止子的终止效应打折扣，一般20bp的距离为宜，正好两个DNA螺旋距离的长度。 详细的你可参考Joanna J.Wright等发表的文章：Transcriptional termination at a fully rho-independent site in Escherichia coli is prevented by uninterrupted translation of the nascent RNA. |
6楼2015-01-09 09:40:35
7楼2016-09-01 16:36:08
