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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 求助！基因ORF与终止子的连接问题
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奇怪人生123

银虫 (小有名气)

[求助] 求助！基因ORF与终止子的连接问题 已有4人参与

各位大神，本菜鸟要构建一个质粒，骨架是pMCB17apx。
    质粒上面有alcA启动子，后面紧跟一个gfp基因，我改造时，就在gfp后的合适位置，连接上了我的目的基因的完整ORF，但是现在缺少终止子。
    虽然手头有trpC基因的终止子可用，但是导师交代连接终止子的时候需要注意的点有不少，我现在也很不清楚，不敢贸然直接去，有哪些大神能指点迷津啊？
    比如，用酶切的方法将终止子连接到目的基因后面，但是之间肯定会有几个无关的碱基（酶切位点），这有关系吗？导师指导说，目的基因和终止子之间，碱基数较多肯定不好，但是太少也会影响发挥作用，是否属实啊？求指点！！！
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实时荧光定量PCR（TaqMan探针法）欢迎和大家探讨~
1楼 2014-05-29 15:04:15
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山脚下的喵

新虫 (小有名气)
请问，TrpC是强启动子么，是的话，在构建载体的时候，需要在末尾加终止子么，终止子加什么比较好呢？
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高山自有方便路，远水自有渡河人？
7楼2016-09-01 16:36:08
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
奇怪人生123: 金币+2, ★有帮助 2014-05-29 21:07:04
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-05-29 22:22:40
建议你参照质粒原有架构，不要改动太多，不然到时候出问题了难分析

[ 发自小木虫客户端 ]
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2楼2014-05-29 16:23:16
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奇怪人生123

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-05-29 16:23:16
建议你参照质粒原有架构，不要改动太多，不然到时候出问题了难分析

这个质粒原本是通过目的基因ORF的单交换来讲整个质粒整合到菌的基因组上的，不需要加终止子。但是我的菌比较特殊，正确单交换、双交换的概率特别低，没办法才想到用随机插入的方式将目的基因的ORF与启动子、终止子整合到基因组上，无奈之举。。。
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实时荧光定量PCR（TaqMan探针法）欢迎和大家探讨~
3楼2014-05-29 21:06:01
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BioChen

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
奇怪人生123: 金币+2, ★有帮助 2014-06-05 10:33:08
终止子是用来终止转录的，ORF和终止子之间的无关序列应该不会影响转录终止和翻译。
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4楼2014-05-30 15:31:12
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