24小时热门版块排行榜    

查看: 7952  |  回复: 11
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

在屋顶唱歌

铁虫 (初入文坛)

[求助] 探针法QPCR扩增曲线呈直线是什么原因 已有4人参与

最近做探针法的QPCR遇到了一个棘手的问题,求助高手指点。之前实验室用的是在生物公司买的试剂,扩的还不错,但是现在老板为了省钱,让我们自己配试剂做,结果惨不忍睹啊。相同的引物和探针,自己配的体系扩增曲线几乎是一条直线,并且起始荧光强度比对照高很多,不知道有没有相同经历的同学,求指点啊。

探针法QPCR扩增曲线呈直线是什么原因
Amplification Plot.jpg


探针法QPCR扩增曲线呈直线是什么原因-1
Multicomponent Plot.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lssmttkl

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 在屋顶唱歌 at 2015-06-15 12:16:56
跑胶了,有条带,但是比买的Buffer产量低很多。...

那你们为什么不用买的BUFFER呢?我以前做的时候就是直接买的BIO-RAD一套东西,只需要自己摸索一下TM值就好了。
8楼2015-07-24 15:47:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

zhangyunjing

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
在屋顶唱歌: 金币+1, 有帮助 2015-06-13 12:49:23
公司的荧光定量相关的Master Mix都是经过反复测试过的,做过大量的工作,不是说按照常规的反应体系就能得到好的结果的。如果要自己配反应体系的话估计你需要花费几个月的时间去筛选哪种酶适合你的实验,并不是所有的酶都适合做荧光定量的。
rainwater
2楼2015-06-12 11:24:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lssmttkl

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
在屋顶唱歌: 金币+1 2015-06-13 12:49:35
是这样的。最好买现成的酶来做。在酶同样的情况下出现这种问题,就是TM值没有摸索好吧。
3楼2015-06-12 16:34:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

在屋顶唱歌

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zhangyunjing at 2015-06-12 11:24:51
公司的荧光定量相关的Master Mix都是经过反复测试过的,做过大量的工作,不是说按照常规的反应体系就能得到好的结果的。如果要自己配反应体系的话估计你需要花费几个月的时间去筛选哪种酶适合你的实验,并不是所有的 ...

我们验证了一下,不是酶的问题,影响大的是反应Buffer,现在不知道是Buffer中的哪种成分的影响,都不知道该怎么继续了
4楼2015-06-13 12:31:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +3 Tide man 2026-08-10 3/150 2026-08-10 21:48 by GZUZM
[基金申请] FileCode能看出啥? +7 要乐观耀哥 2026-08-10 15/750 2026-08-10 19:29 by 要乐观耀哥
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +3 瞬息宇宙 2026-08-10 3/150 2026-08-10 18:27 by Tide man
[基金申请] 静等基金结果 +5 gjjjzhong 2026-08-10 16/800 2026-08-10 17:19 by Tide man
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +14 Lanmanbaby 2026-08-09 22/1100 2026-08-10 14:57 by wwncly
[基金申请] 8月时间戳变的,举个手。玩一下,释放压力 +11 archvillain 2026-08-04 13/650 2026-08-10 14:41 by seekfind
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +5 yang182083 2026-08-06 7/350 2026-08-08 18:29 by zhanghaozhu
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制,评价高的钱多评价低的钱少,但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 听说今天filecode变了 +24 布布和一二 2026-08-06 47/2350 2026-08-07 16:02 by zhiyanjiang
[基金申请] 大家散了吧,后缀研究没有意义,别浪费时间了,过好目前的每一天,不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 好消息?这个有何含义??? +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[基金申请] 纯娱乐,不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
信息提示
请填处理意见