应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 探针法QPCR扩增曲线呈直线是什么原因
51/1返回列表
查看: 8038  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

在屋顶唱歌

铁虫 (初入文坛)

[求助] 探针法QPCR扩增曲线呈直线是什么原因 已有4人参与

最近做探针法的QPCR遇到了一个棘手的问题，求助高手指点。之前实验室用的是在生物公司买的试剂，扩的还不错，但是现在老板为了省钱，让我们自己配试剂做，结果惨不忍睹啊。相同的引物和探针，自己配的体系扩增曲线几乎是一条直线，并且起始荧光强度比对照高很多，不知道有没有相同经历的同学，求指点啊。

探针法QPCR扩增曲线呈直线是什么原因
Amplification Plot.jpg


探针法QPCR扩增曲线呈直线是什么原因-1
Multicomponent Plot.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-06-11 22:28:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lssmttkl

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
在屋顶唱歌: 金币+1 2015-06-13 12:49:35
是这样的。最好买现成的酶来做。在酶同样的情况下出现这种问题，就是TM值没有摸索好吧。
赞一下 回复此楼
3楼2015-06-12 16:34:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

zhangyunjing

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
在屋顶唱歌: 金币+1, ★有帮助 2015-06-13 12:49:23
公司的荧光定量相关的Master Mix都是经过反复测试过的，做过大量的工作，不是说按照常规的反应体系就能得到好的结果的。如果要自己配反应体系的话估计你需要花费几个月的时间去筛选哪种酶适合你的实验，并不是所有的酶都适合做荧光定量的。
赞一下 回复此楼
rainwater
2楼2015-06-12 11:24:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

在屋顶唱歌

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhangyunjing at 2015-06-12 11:24:51
公司的荧光定量相关的Master Mix都是经过反复测试过的，做过大量的工作，不是说按照常规的反应体系就能得到好的结果的。如果要自己配反应体系的话估计你需要花费几个月的时间去筛选哪种酶适合你的实验，并不是所有的 ...

我们验证了一下，不是酶的问题，影响大的是反应Buffer，现在不知道是Buffer中的哪种成分的影响，都不知道该怎么继续了
赞一下 回复此楼
4楼2015-06-13 12:31:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

在屋顶唱歌

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by lssmttkl at 2015-06-12 16:34:04
是这样的。最好买现成的酶来做。在酶同样的情况下出现这种问题，就是TM值没有摸索好吧。

现在酶是一样的，反应条件也一样，唯一不一样的就是Buffer。
赞一下 回复此楼
5楼2015-06-13 12:33:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[找工作] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 3/150 2026-09-16 02:38 by DgNGHc3h5tPl
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +6 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 6/300 2026-09-16 02:02 by DgNGHc3h5tPl
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 3/150 2026-09-15 20:14 by zNcEhTcH7ihq
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 40ms4Wlo4umh 2026-09-14 3/150 2026-09-15 18:59 by CgyNCDVNhGVg
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 17:39 by CgyNCDVNhGVg
[博后之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 5/250 2026-09-15 16:50 by CgyNCDVNhGVg
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 7/350 2026-09-15 16:47 by CgyNCDVNhGVg
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 5/250 2026-09-15 16:35 by CgyNCDVNhGVg
[公派出国] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 4/200 2026-09-15 16:26 by CgyNCDVNhGVg
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 4/200 2026-09-15 16:15 by CgyNCDVNhGVg
[找工作] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +6 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 6/300 2026-09-15 15:02 by CgyNCDVNhGVg
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +6 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 7/350 2026-09-15 14:49 by VMDqgnlKimtZ
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 4/200 2026-09-15 14:34 by VMDqgnlKimtZ
[考博] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 6/300 2026-09-15 14:25 by VMDqgnlKimtZ
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 4/200 2026-09-15 07:02 by 5BDX0d0WFp7t
[公派出国] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 5/250 2026-09-15 06:38 by 5BDX0d0WFp7t
[考研] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:25 by vZfe6xYu34yj
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 4/200 2026-09-14 16:13 by Aj1rhIDL5ixY
[考博] 西北工业大学材料学院电化学传感与催化课题组招收2027年推免研究生、博士生、博士后 +3 马方园 2026-09-10 4/200 2026-09-14 09:29 by Chem张zz
[考博] 27秋季材料博士申请求助 10+3 Cahal1 2026-09-11 4/200 2026-09-14 08:50 by 北京莱茵编辑
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭