24小时热门版块排行榜    

查看: 7966  |  回复: 11
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

在屋顶唱歌

铁虫 (初入文坛)

[求助] 探针法QPCR扩增曲线呈直线是什么原因 已有4人参与

最近做探针法的QPCR遇到了一个棘手的问题,求助高手指点。之前实验室用的是在生物公司买的试剂,扩的还不错,但是现在老板为了省钱,让我们自己配试剂做,结果惨不忍睹啊。相同的引物和探针,自己配的体系扩增曲线几乎是一条直线,并且起始荧光强度比对照高很多,不知道有没有相同经历的同学,求指点啊。

探针法QPCR扩增曲线呈直线是什么原因
Amplification Plot.jpg


探针法QPCR扩增曲线呈直线是什么原因-1
Multicomponent Plot.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangyunjing

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 在屋顶唱歌 at 2015-06-13 12:31:10
我们验证了一下,不是酶的问题,影响大的是反应Buffer,现在不知道是Buffer中的哪种成分的影响,都不知道该怎么继续了...

用你的荧光定量的产物跑个琼脂糖胶看看有没有目的条带,看着荧光信号这么低。
rainwater
6楼2015-06-15 11:38:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

zhangyunjing

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
在屋顶唱歌: 金币+1, 有帮助 2015-06-13 12:49:23
公司的荧光定量相关的Master Mix都是经过反复测试过的,做过大量的工作,不是说按照常规的反应体系就能得到好的结果的。如果要自己配反应体系的话估计你需要花费几个月的时间去筛选哪种酶适合你的实验,并不是所有的酶都适合做荧光定量的。
rainwater
2楼2015-06-12 11:24:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lssmttkl

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
在屋顶唱歌: 金币+1 2015-06-13 12:49:35
是这样的。最好买现成的酶来做。在酶同样的情况下出现这种问题,就是TM值没有摸索好吧。
3楼2015-06-12 16:34:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

在屋顶唱歌

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zhangyunjing at 2015-06-12 11:24:51
公司的荧光定量相关的Master Mix都是经过反复测试过的,做过大量的工作,不是说按照常规的反应体系就能得到好的结果的。如果要自己配反应体系的话估计你需要花费几个月的时间去筛选哪种酶适合你的实验,并不是所有的 ...

我们验证了一下,不是酶的问题,影响大的是反应Buffer,现在不知道是Buffer中的哪种成分的影响,都不知道该怎么继续了
4楼2015-06-13 12:31:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 静等基金结果 +6 gjjjzhong 2026-08-10 18/900 2026-08-13 17:25 by JACS/Angew
[考博] 澳大利亚 Murdoch University 全奖博士招生(3个名额)地质化工冶金领域 +13 AI8RaGaPaSCR 2026-08-07 14/700 2026-08-13 17:15 by KC9MWU4rq4LU
[基金申请] filecode +14 documentary 2026-08-10 16/800 2026-08-13 16:39 by 润生71
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +5 医学老男孩 2026-08-13 11/550 2026-08-13 15:41 by sdfapple719
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +22 Lanmanbaby 2026-08-09 36/1800 2026-08-12 22:50 by sdfapple719
[基金申请] 好奇怪的filecode +5 布布和一二 2026-08-08 6/300 2026-08-12 16:11 by 云上清扬
[论文投稿] 职称评审,求友友推荐见刊最快的期刊 +4 工厂打螺丝 2026-08-08 4/200 2026-08-12 09:18 by hansi2025
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +8 Tide man 2026-08-10 9/450 2026-08-11 20:39 by beefly
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 关于代码变化问题,想知道的进来 +17 且听虎啸 2026-08-07 24/1200 2026-08-10 18:35 by zhangduo2008
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] fileCode有新解读? +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变,有变的大神么? +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
信息提示
请填处理意见