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313cr

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR产物亮孔是怎么回事啊 已有2人参与

给位大神们,求助~~~最近跑PCR遇到问题了,PCR产物跑电泳一直亮孔,在点样孔里跑不出来,具体情况见图。PCR模板是上一次的PCR产物,一共三个PCR产物混合后稀释100倍做模板,然后用TAKARA 的rTaq酶跑电泳,第一次50ul体系,1ul模板,条带正常,目的条带在1500左右,然后扩大体系,100ul体系,跑了几管,结果就条带跑不出来了,后来又摸索了Mg2+浓度,还是没有条带,再换Fermentas 的Pfu酶跑电泳,又没有问题。现在老板只让用Taq扩,不能用Pfu,怎么办啊,亲们,跑了好多次了,没有结果啊,谁能帮着解答一下。PS:应该不是电泳的问题,电泳液,胶这些都是新的,跑其他电泳没用问题。

PCR产物亮孔是怎么回事啊
2015-05-20 OET1、OEP PCR.jpg
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
挂孔了,模板没有处理好吧,胶没有制好,上样量也要注意,用酶量问题,各个方面考虑
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
3楼2015-05-29 16:02:26
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查看全部 4 个回答

xmcliulei

银虫 (小有名气)

我感觉一般挂孔了是因为PCR产物里面酶的原因,蛋白会滞留DNA导致挂孔~建议纯化下PCR产物~
4楼2015-05-29 23:34:32
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