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313cr

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR产物亮孔是怎么回事啊 已有2人参与

给位大神们，求助~~~最近跑PCR遇到问题了，PCR产物跑电泳一直亮孔，在点样孔里跑不出来，具体情况见图。PCR模板是上一次的PCR产物，一共三个PCR产物混合后稀释100倍做模板，然后用TAKARA 的rTaq酶跑电泳，第一次50ul体系，1ul模板，条带正常，目的条带在1500左右，然后扩大体系，100ul体系，跑了几管，结果就条带跑不出来了，后来又摸索了Mg2+浓度，还是没有条带，再换Fermentas 的Pfu酶跑电泳，又没有问题。现在老板只让用Taq扩，不能用Pfu，怎么办啊，亲们，跑了好多次了，没有结果啊，谁能帮着解答一下。PS：应该不是电泳的问题，电泳液，胶这些都是新的，跑其他电泳没用问题。

PCR产物亮孔是怎么回事啊
2015-05-20 OET1、OEP PCR.jpg
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1楼 2015-05-29 15:30:55
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a13515517892

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

商家已经主动声明此回帖可能含有宣传内容
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2楼2015-05-29 15:33:06
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
挂孔了，模板没有处理好吧，胶没有制好，上样量也要注意，用酶量问题，各个方面考虑
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
3楼2015-05-29 16:02:26
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xmcliulei

银虫 (小有名气)
我感觉一般挂孔了是因为PCR产物里面酶的原因，蛋白会滞留DNA导致挂孔~建议纯化下PCR产物~
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4楼2015-05-29 23:34:32
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