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圣主魂

新虫 (初入文坛)

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[求助] PCR扩出来的片段短怎么办？已有5人参与

PCR扩出来的片段比学哥以前做的2100bp短（大约短200bp），引物稍微把内切酶改动了下，体系用过学哥的也是没扩出来。94°：5min;94°：30s，60°：30s；72°：3min;72°：10min；34个循环。一直在做这个悲催的PCR,,,,,求解脱.........

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1楼2015-05-25 09:24:58

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781055707

木虫 (著名写手)

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【答案】应助回帖

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kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2015-05-26 11:23:53

PCR扩出来的片段比学哥以前做的2100bp短（大约短200bp）,这个片段基本上是对的，小200bp是正常的。

引物只换了内切酶的话，退火温度不用换，内切酶的碱基我基本是不计算进退火温度的，35个循环很好。延伸基本是一分钟1000bp，整体上你学哥的条件没问题。把你小200bp的片段送去测序看看，有条件的话，连个T载体，好测通。