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肖云啄木鸟

铜虫 (小有名气)

[求助] 重组毕赤酵母分泌表达目的蛋白的问题

目的蛋白由相同的两条链通过二硫键连接组成,单链分子量在15KD。图片中N为非还原,R为还原。经还原后应为相同的两条链,在电泳图上应为一条带。结果却为2条带!
为什么?如何解决?
1. 有关pH、温度、补料、蛋白水解酶抑制剂、维生素等的实验结果是如此;2. 去糖基化后,也是2条带;3. 摇瓶、10L罐也是如此。

重组毕赤酵母分泌表达目的蛋白的问题
15%胶-N.jpg


重组毕赤酵母分泌表达目的蛋白的问题-1
15%胶-R.jpg
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小鱼爱骆驼

新虫 (初入文坛)

你好,我想问一下你的蛋白是如何去糖基化的呢?能详细说一下吗?或者有个参考文献可以参考一下的!万分感谢~~~
4楼2016-01-22 10:55:00
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dlyxy08

新虫 (小有名气)

是不是分泌表达时设计的酶切位点有两个啊!
2楼2015-11-25 19:23:21
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changqiang

银虫 (初入文坛)

送红花一朵
您好,我最近也想做pichia ,但是相关资料不多,请问能不能发一些protocol给我,先谢了,584223048@qq.com
3楼2016-01-10 00:55:19
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lixinlihu

金虫 (正式写手)

5楼2017-10-03 17:33:33
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