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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 重组毕赤酵母分泌表达目的蛋白的问题
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肖云啄木鸟

铜虫 (小有名气)

[求助] 重组毕赤酵母分泌表达目的蛋白的问题

目的蛋白由相同的两条链通过二硫键连接组成，单链分子量在15KD。图片中N为非还原，R为还原。经还原后应为相同的两条链，在电泳图上应为一条带。结果却为2条带!
为什么？如何解决？
1. 有关pH、温度、补料、蛋白水解酶抑制剂、维生素等的实验结果是如此；2. 去糖基化后，也是2条带；3. 摇瓶、10L罐也是如此。

重组毕赤酵母分泌表达目的蛋白的问题
15%胶-N.jpg


重组毕赤酵母分泌表达目的蛋白的问题-1
15%胶-R.jpg
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changqiang

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1楼 2015-05-21 14:34:06
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小鱼爱骆驼

新虫 (初入文坛)
你好，我想问一下你的蛋白是如何去糖基化的呢？能详细说一下吗？或者有个参考文献可以参考一下的！万分感谢~~~
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4楼2016-01-22 10:55:00
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dlyxy08

新虫 (小有名气)
是不是分泌表达时设计的酶切位点有两个啊！
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2楼2015-11-25 19:23:21
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changqiang

银虫 (初入文坛)
送红花一朵
您好，我最近也想做pichia ,但是相关资料不多，请问能不能发一些protocol给我，先谢了,584223048@qq.com
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3楼2016-01-10 00:55:19
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lixinlihu

金虫 (正式写手)
信号肽没有干掉

发自小木虫Android客户端
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5楼2017-10-03 17:33:33
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