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岳士忠

新虫 (正式写手)

[求助] sds-page跑出来竟然是这样的!哪位大侠知道原因?已有2人参与

哪位大侠知道原因?急!!

sds-page跑出来竟然是这样的!哪位大侠知道原因?
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恶魔的左眼

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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10.目的蛋白质条带模糊
电泳凝胶浓度选择不当。
低于10Kd的小分子蛋白质要用Tricine胶。
靠近前沿的电泳带分辨率不佳。根据分子量与凝胶孔径的关系,选择适当浓度的凝胶。
蛋白质样品水解。注意除去蛋白质样品的内源性的水解酶,不要反复冻融。
电泳时间过长或过短。溴酚蓝达到分离胶的底部即应该关闭电泳电源。
缓冲溶液、SDS都要新鲜配制。
避免加样过多,提高分辨率。小体积样品可给出窄带,加样体积根据样品浓度和凝胶厚度灵活掌握。一般上样体积为10-15uL(即2-10ug蛋白质)。
加热变性后的蛋白质样品要放置到室温即电泳,不要久放,因为蛋白质的二硫键在高温下可能是会断开,但是暴露于空气中温度降低会重新形成二硫键,而且可能在过久放置过程中蛋白质可能会再折叠,更不要扔到冰箱里保存。

摘抄自SDS-PAGE电泳常见问题解析(FAQ)
早上一副睡不醒的样子,下午一副没睡醒的样子,晚上一副打了鸡血的样子!
6楼2015-05-18 11:06:00
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
样品里杂质太多,离子强度过高。
2楼2015-05-16 04:24:23
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xiongding70

金虫 (初入文坛)

可能是制分离胶时不均匀,多混合下,还有你的上样量高了。
3楼2015-05-16 20:56:47
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岳士忠

新虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by xiongding70 at 2015-05-16 20:56:47
可能是制分离胶时不均匀,多混合下,还有你的上样量高了。

前面三条是别人的样,第四条和第七条是Maker都还行,胶没问题啊
4楼2015-05-16 21:15:29
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