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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » sds-page跑出来竟然是这样的！哪位大侠知道原因？
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岳士忠

新虫 (正式写手)

[求助] sds-page跑出来竟然是这样的！哪位大侠知道原因？ 已有2人参与

哪位大侠知道原因？急！！

sds-page跑出来竟然是这样的！哪位大侠知道原因？
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1楼 2015-05-15 16:46:30
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恶魔的左眼

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
10.目的蛋白质条带模糊
电泳凝胶浓度选择不当。
低于10Kd的小分子蛋白质要用Tricine胶。
靠近前沿的电泳带分辨率不佳。根据分子量与凝胶孔径的关系，选择适当浓度的凝胶。
蛋白质样品水解。注意除去蛋白质样品的内源性的水解酶，不要反复冻融。
电泳时间过长或过短。溴酚蓝达到分离胶的底部即应该关闭电泳电源。
缓冲溶液、SDS都要新鲜配制。
避免加样过多，提高分辨率。小体积样品可给出窄带，加样体积根据样品浓度和凝胶厚度灵活掌握。一般上样体积为10-15uL（即2-10ug蛋白质）。
加热变性后的蛋白质样品要放置到室温即电泳，不要久放，因为蛋白质的二硫键在高温下可能是会断开，但是暴露于空气中温度降低会重新形成二硫键，而且可能在过久放置过程中蛋白质可能会再折叠，更不要扔到冰箱里保存。

摘抄自SDS-PAGE电泳常见问题解析（FAQ）
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早上一副睡不醒的样子，下午一副没睡醒的样子，晚上一副打了鸡血的样子！
6楼2015-05-18 11:06:00
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
样品里杂质太多，离子强度过高。
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2楼2015-05-16 04:24:23
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xiongding70

金虫 (初入文坛)
可能是制分离胶时不均匀，多混合下，还有你的上样量高了。
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3楼2015-05-16 20:56:47
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岳士忠

新虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by xiongding70 at 2015-05-16 20:56:47
可能是制分离胶时不均匀，多混合下，还有你的上样量高了。

前面三条是别人的样，第四条和第七条是Maker都还行，胶没问题啊
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4楼2015-05-16 21:15:29
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