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sds-page跑出来竟然是这样的!哪位大侠知道原因?
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岳士忠
新虫
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sds-page跑出来竟然是这样的!哪位大侠知道原因?
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哪位大侠知道原因?急!!
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1楼
2015-05-15 16:46:30
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恶魔的左眼
木虫
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专业: 蛋白质组学
【答案】应助回帖
感谢参与,应助指数 +1
10.目的蛋白质条带模糊
电泳凝胶浓度选择不当。
低于10Kd的小分子蛋白质要用Tricine胶。
靠近前沿的电泳带分辨率不佳。根据分子量与凝胶孔径的关系,选择适当浓度的凝胶。
蛋白质样品水解。注意除去蛋白质样品的内源性的水解酶,不要反复冻融。
电泳时间过长或过短。溴酚蓝达到分离胶的底部即应该关闭电泳电源。
缓冲溶液、SDS都要新鲜配制。
避免加样过多,提高分辨率。小体积样品可给出窄带,加样体积根据样品浓度和凝胶厚度灵活掌握。一般上样体积为10-15uL(即2-10ug蛋白质)。
加热变性后的蛋白质样品要放置到室温即电泳,不要久放,因为蛋白质的二硫键在高温下可能是会断开,但是暴露于空气中温度降低会重新形成二硫键,而且可能在过久放置过程中蛋白质可能会再折叠,更不要扔到冰箱里保存。
摘抄自
SDS-PAGE电泳常见问题解析(FAQ)
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早上一副睡不醒的样子,下午一副没睡醒的样子,晚上一副打了鸡血的样子!
6楼
2015-05-18 11:06:00
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cicelyzh
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红花: 72
帖子: 3516
在线: 456小时
虫号: 1614001
注册: 2012-02-13
专业: 生物化学
【答案】应助回帖
感谢参与,应助指数 +1
样品里杂质太多,离子强度过高。
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2楼
2015-05-16 04:24:23
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xiongding70
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帖子: 27
在线: 15.2小时
虫号: 2570572
注册: 2013-07-29
性别: GG
专业: 食品加工技术
可能是制分离胶时不均匀,多混合下,还有你的上样量高了。
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3楼
2015-05-16 20:56:47
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岳士忠
新虫
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虫号: 1660083
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性别: GG
专业: 食品科学基础
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3楼
:
Originally posted by
xiongding70
at 2015-05-16 20:56:47
可能是制分离胶时不均匀,多混合下,还有你的上样量高了。
前面三条是别人的样,第四条和第七条是Maker都还行,胶没问题啊
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4楼
2015-05-16 21:15:29
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