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岳士忠

新虫 (正式写手)

应助: 0 (幼儿园)
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虫号: 1660083
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[求助] sds-page跑出来竟然是这样的！哪位大侠知道原因？已有2人参与

哪位大侠知道原因？急！！

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1楼 2015-05-15 16:46:30

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

恶魔的左眼

木虫 (正式写手)

应助: 110 (高中生)
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红花: 20
帖子: 425
在线: 880.6小时
虫号: 3705608
注册: 2015-03-03
专业: 蛋白质组学

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

10.目的蛋白质条带模糊
电泳凝胶浓度选择不当。
低于10Kd的小分子蛋白质要用Tricine胶。
靠近前沿的电泳带分辨率不佳。根据分子量与凝胶孔径的关系，选择适当浓度的凝胶。
蛋白质样品水解。注意除去蛋白质样品的内源性的水解酶，不要反复冻融。
电泳时间过长或过短。溴酚蓝达到分离胶的底部即应该关闭电泳电源。
缓冲溶液、SDS都要新鲜配制。
避免加样过多，提高分辨率。小体积样品可给出窄带，加样体积根据样品浓度和凝胶厚度灵活掌握。一般上样体积为10-15uL（即2-10ug蛋白质）。
加热变性后的蛋白质样品要放置到室温即电泳，不要久放，因为蛋白质的二硫键在高温下可能是会断开，但是暴露于空气中温度降低会重新形成二硫键，而且可能在过久放置过程中蛋白质可能会再折叠，更不要扔到冰箱里保存。

摘抄自SDS-PAGE电泳常见问题解析（FAQ）