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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 单点突变后跑SDS-PAGE目的条带的分子量小了一半
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mengyouren

铜虫 (著名写手)

[求助] 单点突变后跑SDS-PAGE目的条带的分子量小了一半 已有3人参与

如题，我对目的基因做了多个单点突变，结果发现两个突变体在做蛋白电泳时目的条带的位置和其他突变体及原始蛋白相比有很明显的位移，按蛋白标准计算分子量差不多差了一倍，我用的是pET32a载体在E.coli BL21 （trixB）中表达的，细胞破碎时这两个突变体比其他的更澄清些，请教高人给指点一下，是什么原因导致的，谢谢！
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1楼 2015-01-15 17:05:42
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ptttmt

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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感谢参与，应助指数 +1
mengyouren: 金币+30, ★有帮助 2015-05-20 16:38:51
补充完信息才好分析啊，你的蛋白多大，融合了32a标签蛋白后多大，突变体跑出来多大，有图片否？发上来瞄瞄

[ 发自小木虫客户端 ]
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2楼2015-01-15 19:02:02
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红卫大兵

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
mengyouren: 金币+30 2015-05-20 16:39:09
突变不会是把氨基酸系列变成终止氨基酸了吧？
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3楼2015-01-15 19:06:49
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mengyouren

铜虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ptttmt at 2015-01-15 19:02:02
补充完信息才好分析啊，你的蛋白多大，融合了32a标签蛋白后多大，突变体跑出来多大，有图片否？发上来瞄瞄

我的蛋白90kDa左右，我做了几个单点突变，大多数正常，只有两个突变后分子量变成45kDa左右了
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4楼2015-01-16 14:07:31
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mengyouren

铜虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 红卫大兵 at 2015-01-15 19:06:49
突变不会是把氨基酸系列变成终止氨基酸了吧？

都是突变成甘氨酸的
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5楼2015-01-16 14:08:20
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叶晓波1572

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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mengyouren: 金币+40, ★有帮助 2015-05-20 16:39:20
这个情况我也觉得可能是突变成终止密码了 楼主仔细检查一下突变后的序列。
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6楼2015-04-14 14:06:13
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