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well_想太多

新虫 (小有名气)

[求助] sds-page跑电泳Marker为什么只跑出四条带 已有3人参与

我跑的蛋白大小差不多36KDa，用的marker是takala公司的，大小分别是97.2,66.4,44.3,29.0,20.1,14.3KDa，浓缩胶时用的是10mA电流，分离胶是20mA，可是跑完只有marker只有4条带，请问这是怎么回事呢？是电流的原因吗？当我用20mA跑分离胶时电压达到了220V左右，这样正常吗？还有我考察了一下不同浓度IPTG的诱导效果，但是结果都差不多，请问IPTG的浓度选择与蛋白分子量大小有关吗？我都是按照同实验室跑200KDa蛋白的同学的数据来的，他的IPTG浓度从0.01-1不等
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1楼 2015-03-12 14:35:46
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s_lich28

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
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well_想太多: 金币+2, ★有帮助 2015-03-13 09:42:42
楼主的胶是百分之几的？浓度越低，电泳时间越长就越容易让小分子条带跑过头，俗称“跳海”。建议楼主用带颜色的marker（pre-stain marker），这样可以根据条带的速度来控制电泳时间。希望有帮助。
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There is nothing either good or bad, thinking makes it so.
2楼2015-03-12 17:38:03
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匿名

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
well_想太多: 金币+2, ★有帮助 2015-03-13 09:45:27
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3楼2015-03-12 23:19:14
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well_想太多

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by s_lich28 at 2015-03-12 17:38:03
楼主的胶是百分之几的？浓度越低，电泳时间越长就越容易让小分子条带跑过头，俗称“跳海”。建议楼主用带颜色的marker（pre-stain marker），这样可以根据条带的速度来控制电泳时间。希望有帮助。

12%的胶浓度，我打算用15%的再跑一下看看，但是溴酚蓝那条线没有跑出去，难道小分子量的蛋白已经跑过溴酚蓝了？还是说小分量的蛋白都堆积在溴酚蓝线那个位置上？
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4楼2015-03-13 09:45:17
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well_想太多

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 立林258369 at 2015-03-12 23:19:14
前面的小蛋白可能已经跑出去了，建议减少分离胶的时间

我怕减少分离胶的时间下面的小分量蛋白会不会跑不开呢？因为溴酚蓝那条线距离底部是1cm位置停下的，不太明白
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5楼2015-03-13 09:46:47
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小尾巴妞

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
well_想太多: 金币+1, ★有帮助 2015-03-14 21:06:31
12%的分离胶的话按照楼主的描述不应该是跑出去了，个人建议检查一下电泳的其他东西，包括缓冲液等等，我们实验室以前就出现过有人配母液配错，导致大家跑出来的条带都出现问题。。。我们实验室当时是配母液的人电泳缓冲Buffer没有给加SDS，最后导致好多人那天跑出来的胶都是marker条带形状都不对
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6楼2015-03-13 09:57:24
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匿名

★
well_想太多: 金币+1, ★有帮助 2015-03-14 21:06:21
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7楼2015-03-13 10:29:02
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