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well_想太多

新虫 (小有名气)

[求助] sds-page跑电泳Marker为什么只跑出四条带 已有3人参与

我跑的蛋白大小差不多36KDa,用的marker是takala公司的,大小分别是97.2,66.4,44.3,29.0,20.1,14.3KDa,浓缩胶时用的是10mA电流,分离胶是20mA,可是跑完只有marker只有4条带,请问这是怎么回事呢?是电流的原因吗?当我用20mA跑分离胶时电压达到了220V左右,这样正常吗?还有我考察了一下不同浓度IPTG的诱导效果,但是结果都差不多,请问IPTG的浓度选择与蛋白分子量大小有关吗?我都是按照同实验室跑200KDa蛋白的同学的数据来的,他的IPTG浓度从0.01-1不等
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well_想太多

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 立林258369 at 2015-03-12 23:19:14
前面的小蛋白可能已经跑出去了,建议减少分离胶的时间

我怕减少分离胶的时间下面的小分量蛋白会不会跑不开呢?因为溴酚蓝那条线距离底部是1cm位置停下的,不太明白
5楼2015-03-13 09:46:47
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s_lich28

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
well_想太多: 金币+2, ★有帮助 2015-03-13 09:42:42
楼主的胶是百分之几的?浓度越低,电泳时间越长就越容易让小分子条带跑过头,俗称“跳海”。建议楼主用带颜色的marker(pre-stain marker),这样可以根据条带的速度来控制电泳时间。希望有帮助。
There is nothing either good or bad, thinking makes it so.
2楼2015-03-12 17:38:03
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匿名

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
well_想太多: 金币+2, ★有帮助 2015-03-13 09:45:27
本帖仅楼主可见
3楼2015-03-12 23:19:14
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well_想太多

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by s_lich28 at 2015-03-12 17:38:03
楼主的胶是百分之几的?浓度越低,电泳时间越长就越容易让小分子条带跑过头,俗称“跳海”。建议楼主用带颜色的marker(pre-stain marker),这样可以根据条带的速度来控制电泳时间。希望有帮助。

12%的胶浓度,我打算用15%的再跑一下看看,但是溴酚蓝那条线没有跑出去,难道小分子量的蛋白已经跑过溴酚蓝了?还是说小分量的蛋白都堆积在溴酚蓝线那个位置上?
4楼2015-03-13 09:45:17
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