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1楼2015-05-15 16:46:30

cicelyzh

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【答案】应助回帖

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样品里杂质太多，离子强度过高。

2楼2015-05-16 04:24:23

xiongding70

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可能是制分离胶时不均匀，多混合下，还有你的上样量高了。

3楼2015-05-16 20:56:47

岳士忠

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引用回帖:

3楼: Originally posted by xiongding70 at 2015-05-16 20:56:47
可能是制分离胶时不均匀，多混合下，还有你的上样量高了。

前面三条是别人的样，第四条和第七条是Maker都还行，胶没问题啊

4楼2015-05-16 21:15:29

岳士忠

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2楼: Originally posted by cicelyzh at 2015-05-16 04:24:23
样品里杂质太多，离子强度过高。

大侠，怎么除杂质和离子啊？求赐教~刚开始做，不懂。是动物样品，可能是脂肪影响？

5楼2015-05-16 21:17:24

恶魔的左眼

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【答案】应助回帖

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10.目的蛋白质条带模糊
电泳凝胶浓度选择不当。
低于10Kd的小分子蛋白质要用Tricine胶。
靠近前沿的电泳带分辨率不佳。根据分子量与凝胶孔径的关系，选择适当浓度的凝胶。
蛋白质样品水解。注意除去蛋白质样品的内源性的水解酶，不要反复冻融。
电泳时间过长或过短。溴酚蓝达到分离胶的底部即应该关闭电泳电源。
缓冲溶液、SDS都要新鲜配制。
避免加样过多，提高分辨率。小体积样品可给出窄带，加样体积根据样品浓度和凝胶厚度灵活掌握。一般上样体积为10-15uL（即2-10ug蛋白质）。
加热变性后的蛋白质样品要放置到室温即电泳，不要久放，因为蛋白质的二硫键在高温下可能是会断开，但是暴露于空气中温度降低会重新形成二硫键，而且可能在过久放置过程中蛋白质可能会再折叠，更不要扔到冰箱里保存。

摘抄自SDS-PAGE电泳常见问题解析（FAQ）

早上一副睡不醒的样子，下午一副没睡醒的样子，晚上一副打了鸡血的样子！

6楼2015-05-18 11:06:00