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帆蚌侠

新虫 (初入文坛)

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[求助] 毕赤酵母表达蛋白电转化遗传霉素筛选后，跑PCR出现的问题已有1人参与

毕赤酵母表达蛋白，将重组质粒电转化进入GS115后，用了浓度为1.5的G418遗传霉素筛选后，挑菌裂解，用3AOX1和自己基因的上游引物跑PCR，除了我要的目的片段外，怎么还有一条100的片段啊？？？大神们，help

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2015-05-11 23:05:10, 433.05 K

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1楼 2015-05-11 23:05:24

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luwei13566

木虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

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感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2015-05-12 13:29:39

LZ你的问题有必要再做两个对照实验：
1.用5'AOX/你基因下游引物，以你的裂解液为模板扩增一下
2.用5'AOX/3'AOX为引物，扩增一下
以上两个结合你用的那一套引物基本上可以验证你基因插入的位置

你图片上那两条带是伴生的，我估计下面那条带是因为你的引物不特异，你可以用你构件好的重组质粒做模板，用基因上游引物/3’AOX做引物做个扩增，多半也有下面那条杂带。