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帆蚌侠

新虫 (初入文坛)

[求助] 毕赤酵母表达蛋白电转化遗传霉素筛选后,跑PCR出现的问题 已有1人参与

毕赤酵母表达蛋白,将重组质粒电转化进入GS115后,用了浓度为1.5的G418遗传霉素筛选后,挑菌裂解,用3AOX1和自己基因的上游引物跑PCR,除了我要的目的片段外,怎么还有一条100的片段啊???大神们,help
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luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2015-05-12 13:29:39
LZ你的问题有必要再做两个对照实验:
1.用5'AOX/你基因下游引物,以你的裂解液为模板扩增一下
2.用5'AOX/3'AOX为引物,扩增一下
以上两个结合你用的那一套引物基本上可以验证你基因插入的位置

你图片上那两条带是伴生的,我估计下面那条带是因为你的引物不特异,你可以用你构件好的重组质粒做模板,用基因上游引物/3’AOX做引物做个扩增,多半也有下面那条杂带。
大家相互帮助哈
2楼2015-05-12 09:43:25
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pangzi-胖子

新虫 (初入文坛)

请问你用的是什么载体?建议好好看看质粒图谱
3楼2015-05-16 06:53:33
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