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弥家小姊

铁虫 (初入文坛)

[交流] Taqman探针法做qPCR,标曲结果很差,求高手指点 已有3人参与

用Taqman探针法做qPCR,引物和探针都用了管家基因,但做出来的标曲很差,见附件中的图,求跪高手帮忙啊

Taqman探针法做qPCR,标曲结果很差,求高手指点
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Taqman探针法做qPCR,标曲结果很差,求高手指点-1
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love_st

金虫 (著名写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
后面低浓度的明显没有稀释下去,恐怕有污染,所以低浓度无法分开
2楼2015-04-30 10:25:48
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弥家小姊

铁虫 (初入文坛)

我用十倍的梯度稀释的DNA,做之前每个都测了一下Qubit,也正常,DNA30ng/ul样子
3楼2015-04-30 10:55:42
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zhangyunjing

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
试试构建含有你目的片段的质粒吧,然后以质粒DNA为模板,做标准曲线
rainwater
4楼2015-04-30 11:09:39
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弥家小姊

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by love_st at 2015-04-30 10:25:48
后面低浓度的明显没有稀释下去,恐怕有污染,所以低浓度无法分开

我的mix是新买的,模板刚用普通PCR做过别的实验没问题,想来想去只可能探针有污染,如果是它会造成这种现象吗?
5楼2015-04-30 16:17:40
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杨仔儿

木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你好,请教你一个问题,探针法q-pcr中,探针3‘端有淬灭集团,我最近找公司合成的探针我要求3’端为MGB基团,但是他合成的是BHQ基团,我问公司,他们说只是每个公司的叫法不一样,原料是一样的,你这方面了解吗?
6楼2016-05-31 16:08:26
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