| 查看: 2184 | 回复: 5 | ||
jbj1001银虫 (小有名气)
|
[求助]
诡异的qPCR结果，请大家帮忙解释下
|
|
样品是小鼠的二细胞胚胎，做GAPDH的标准曲线，出现的结果让我很困惑。用的是ABI的Arcturus® PicoPure™ RNA Isolation Kit，号称能够提取单个细胞的RNA，但由于由于收集的胚胎不多，所以提取的RNA的量还是比较少的，大约有40多ng在10ul反转录体系里面。今天做标准曲线时取了其中的3.5ul先稀释10倍到35ul，然后依次按照5倍的梯度稀释。实时定量PCR用的试剂盒是TAKARA的DRR820，机器是ABI7500。 看完附图后，我的问题是 1. 为什么625、125倍浓度的扩增曲线在一开始就出现峰，而ct值也分别只有15、25左右？ 2. 我以5倍浓度的梯度稀释，为什么ct值会相差10左右？ 3. 忽略掉最低两个浓度后的标准曲线slope：-12.24，Y-inter：55.271，R2：0.998，EFF%：17.551，这正常吗？  标准曲线.png  最后两个浓度去掉以后的标曲.png  625倍浓度（最高浓度）的扩增曲线.png  125倍浓度的扩增曲线.png  25倍浓度的扩增曲线.png  5倍浓度的扩增曲线.png |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有184人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- qPCR的怪异结果
已经有4人回复
匿名
用户注销 (正式写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1322.5
- 散金: 419
- 红花: 8
- 帖子: 594
- 在线: 52.9小时
- 虫号: 0
- 注册: 2009-09-16
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
2楼2013-11-05 00:13:13
沙门小rna
金虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 28 (小学生)
- 金币: 1117.7
- 散金: 5
- 红花: 6
- 沙发: 6
- 帖子: 644
- 在线: 76.7小时
- 虫号: 2012528
- 注册: 2012-09-19
- 专业: 病原细菌、细菌感染与宿主
3楼2013-11-05 14:42:41
jbj1001
银虫 (小有名气)
- 应助: 11 (小学生)
- 金币: 510.5
- 帖子: 131
- 在线: 67.9小时
- 虫号: 753465
- 注册: 2009-04-20
- 专业: 血糖调控异常与胰岛素抵抗
4楼2013-11-07 10:03:11
沙门小rna
金虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 28 (小学生)
- 金币: 1117.7
- 散金: 5
- 红花: 6
- 沙发: 6
- 帖子: 644
- 在线: 76.7小时
- 虫号: 2012528
- 注册: 2012-09-19
- 专业: 病原细菌、细菌感染与宿主
jbj10015楼2013-11-07 10:33:59
jbj1001
银虫 (小有名气)
- 应助: 11 (小学生)
- 金币: 510.5
- 帖子: 131
- 在线: 67.9小时
- 虫号: 753465
- 注册: 2009-04-20
- 专业: 血糖调控异常与胰岛素抵抗
6楼2013-11-09 05:17:39