应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 诡异的qPCR结果，请大家帮忙解释下
51/1返回列表
查看: 2273  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

jbj1001

银虫 (小有名气)

[求助] 诡异的qPCR结果，请大家帮忙解释下

样品是小鼠的二细胞胚胎，做GAPDH的标准曲线，出现的结果让我很困惑。用的是ABI的Arcturus® PicoPure™ RNA Isolation Kit，号称能够提取单个细胞的RNA，但由于由于收集的胚胎不多，所以提取的RNA的量还是比较少的，大约有40多ng在10ul反转录体系里面。今天做标准曲线时取了其中的3.5ul先稀释10倍到35ul，然后依次按照5倍的梯度稀释。实时定量PCR用的试剂盒是TAKARA的DRR820，机器是ABI7500。

看完附图后，我的问题是
1.        为什么625、125倍浓度的扩增曲线在一开始就出现峰，而ct值也分别只有15、25左右？
2.        我以5倍浓度的梯度稀释，为什么ct值会相差10左右？
3.        忽略掉最低两个浓度后的标准曲线slope：-12.24，Y-inter：55.271，R2：0.998，EFF%：17.551，这正常吗？
诡异的qPCR结果，请大家帮忙解释下
标准曲线.png


诡异的qPCR结果，请大家帮忙解释下-1
最后两个浓度去掉以后的标曲.png


诡异的qPCR结果，请大家帮忙解释下-2
625倍浓度（最高浓度）的扩增曲线.png


诡异的qPCR结果，请大家帮忙解释下-3
125倍浓度的扩增曲线.png


诡异的qPCR结果，请大家帮忙解释下-4
25倍浓度的扩增曲线.png


诡异的qPCR结果，请大家帮忙解释下-5
5倍浓度的扩增曲线.png
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-11-03 04:41:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

沙门小rna

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by jbj1001 at 2013-11-07 10:03:11
产物没有跑电泳，但是溶解曲线是单峰。换了牛细胞的样品做的GAPDH标准曲线很好。这个是小鼠的GAPDH，还做了小鼠的另外一个基因的，也是和这个一样的。...

首先无语的结果
然后。。。。。光从现象上解释就是你一开始就有很强的荧光强度，感觉后面ct阈值相似了。是不是样本没冰上弄啊？还是什么别的原因，光看图分析是无解。
赞一下(1人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

jbj1001
应助之星就是我~没错。你没有看错~
5楼2013-11-07 10:33:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

匿名

用户注销 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
jbj1001: 金币+10, ★有帮助 2013-11-05 00:15:34
本帖仅楼主可见
赞一下
2楼2013-11-05 00:13:13
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

沙门小rna

金虫 (正式写手)
扩增效率怎么那么低呢。你体系有问题啊。ct一般18-30之间比较好。太高太低都不行。效率最好是100%但是不可能达到。但是17%太低了。刚开始就达到峰值我估摸是你非特性扩增吧。是不是引物么有选好。建议你把产物跑一个电泳看看条带是否是你要的。~
赞一下 回复此楼
应助之星就是我~没错。你没有看错~
3楼2013-11-05 14:42:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jbj1001

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 沙门小rna at 2013-11-05 14:42:41
扩增效率怎么那么低呢。你体系有问题啊。ct一般18-30之间比较好。太高太低都不行。效率最好是100%但是不可能达到。但是17%太低了。刚开始就达到峰值我估摸是你非特性扩增吧。是不是引物么有选好。建议你把产物跑一个 ...

产物没有跑电泳，但是溶解曲线是单峰。换了牛细胞的样品做的GAPDH标准曲线很好。这个是小鼠的GAPDH，还做了小鼠的另外一个基因的，也是和这个一样的。
赞一下 回复此楼
4楼2013-11-07 10:03:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] [复试调剂]西南科技大学国防/材料导师推荐 +3 尖角小荷 2026-03-16 6/300 2026-03-16 23:21 by 尖角小荷
[考研] 化学工程321分求调剂 +9 大米饭！ 2026-03-15 12/600 2026-03-16 21:59 by 大米饭！
[考研] 333求调剂 +3 文思客 2026-03-16 7/350 2026-03-16 18:21 by 文思客
[考研] 一志愿苏州大学材料工程（085601）专硕有科研经历三项国奖两个实用型专利一项省级立项 +3 大火山小火山 2026-03-16 5/250 2026-03-16 16:54 by barlinike
[考研] 283求调剂 +10 小楼。 2026-03-12 14/700 2026-03-16 16:08 by 13811244083
[教师之家] 焦虑 +7 水冰月月野兔 2026-03-13 9/450 2026-03-16 10:00 by Quakerbird
[考研] 311求调剂 +6 冬十三 2026-03-15 6/300 2026-03-16 08:00 by wang_dand
[考研] 328求调剂 +3 5201314Lsy！ 2026-03-13 6/300 2026-03-14 15:31 by hyswxzs
[考研] 学硕285求调剂 +13 Wisjxn 2026-03-12 46/2300 2026-03-14 10:33 by JourneyLucky
[考研] 271求调剂 +10 生如夏花… 2026-03-11 10/500 2026-03-14 00:35 by 卖报员小雨
[考研] 279求调剂 +3 Dizzy123@ 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:02 by JourneyLucky
[考研] 26调剂/材料/英一数二/总分289/已过A区线 +6 步川酷紫123 2026-03-13 6/300 2026-03-13 21:59 by 星空星月
[考研] 0703化学一志愿211 总分320求调剂 +5 玛卡巴卡啊哈 2026-03-11 5/250 2026-03-13 21:40 by JourneyLucky
[考研] 工科，求调剂 +3 我887 2026-03-11 3/150 2026-03-13 21:39 by JourneyLucky
[考研] 329求调剂 +3 miaodesi 2026-03-12 4/200 2026-03-13 20:53 by 18595523086
[考研] 工科278分求调剂 +5 周慢热啊 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:49 by JourneyLucky
[考研] 0817化学工程与技术考研312分调剂 +3 T123 tt 2026-03-12 3/150 2026-03-13 10:49 by houyaoxu
[考研] 333求调剂 +3 152697 2026-03-12 4/200 2026-03-13 07:08 by Iveryant
[考研] 求调剂材料专硕293 +6 段_(:з」∠)_ 2026-03-10 6/300 2026-03-10 18:22 by ms629
[考研] 收调剂 +7 调剂的考研学生 2026-03-10 7/350 2026-03-10 17:57 by 麦茶汤圆
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭