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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » Taqman探针法做qPCR，标曲结果很差，求高手指点
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弥家小姊

铁虫 (初入文坛)

[交流] Taqman探针法做qPCR，标曲结果很差，求高手指点 已有3人参与

用Taqman探针法做qPCR，引物和探针都用了管家基因，但做出来的标曲很差，见附件中的图，求跪高手帮忙啊

Taqman探针法做qPCR，标曲结果很差，求高手指点
1.jpg


Taqman探针法做qPCR，标曲结果很差，求高手指点-1
2.jpg
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1楼 2015-04-30 10:02:58
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love_st

金虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
后面低浓度的明显没有稀释下去，恐怕有污染，所以低浓度无法分开
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2楼2015-04-30 10:25:48
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弥家小姊

铁虫 (初入文坛)
我用十倍的梯度稀释的DNA，做之前每个都测了一下Qubit，也正常，DNA30ng/ul样子
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3楼2015-04-30 10:55:42
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zhangyunjing

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
试试构建含有你目的片段的质粒吧，然后以质粒DNA为模板，做标准曲线
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rainwater
4楼2015-04-30 11:09:39
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弥家小姊

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by love_st at 2015-04-30 10:25:48
后面低浓度的明显没有稀释下去，恐怕有污染，所以低浓度无法分开

我的mix是新买的，模板刚用普通PCR做过别的实验没问题，想来想去只可能探针有污染，如果是它会造成这种现象吗？
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5楼2015-04-30 16:17:40
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杨仔儿

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你好，请教你一个问题，探针法q-pcr中，探针3‘端有淬灭集团，我最近找公司合成的探针我要求3’端为MGB基团，但是他合成的是BHQ基团，我问公司，他们说只是每个公司的叫法不一样，原料是一样的，你这方面了解吗？
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6楼2016-05-31 16:08:26
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