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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 关于构建基因表达载体，以及基因开放阅读框
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monkey_pxs

金虫 (小有名气)

[交流] 关于构建基因表达载体，以及基因开放阅读框

求大神指导！！
我最近在构建基因表达载体，本来就想着从NCBI上查到目的基因片段，然后通过PCR得到目的片段，再连接到表达载体上构建得到重组质粒，但是查阅文献的时候，却发现很多构建表达载体的话，都会连接的是目的基因的开放阅读框，然后再表达，这点让我很困惑，所以特来开贴求大神指导一二
我想问问，如果我要构建目的基因表达载体，那么我应该
1. PCR目的基因片段连接到表达载体上进行表达即可？
2. PCR得到目的基因片段的ORF，连接到表达载体上进行表达即可？
3.将目的片段与其ORF一起克隆到我的表达载体上进行表达？
到底哪种做法是对的？而且不会影响我的实验结果？哦，忘了说，我是想做过表达的。
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1楼 2015-04-27 16:33:56
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foxs2

木虫 (文坛精英)
★
monkey_pxs(金币+1): 谢谢参与
2015
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12楼2015-04-27 17:35:03
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monkey_pxs

金虫 (小有名气)
为什么都是来领金币的，没有给意见的，哎，好伤心...
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16楼2015-04-27 17:41:09
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)
★
monkey_pxs(金币+1): 谢谢参与
将ORF连到目的载体上表达
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21楼2015-04-27 20:20:49
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monkey_pxs

金虫 (小有名气)
引用回帖:
21楼: Originally posted by stone2239 at 2015-04-27 20:20:49
将ORF连到目的载体上表达

那如果根据NCBI查得目的片段序列，PCR后连上去是否可以呢？
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22楼2015-04-27 20:28:47
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
22楼: Originally posted by monkey_pxs at 2015-04-27 20:28:47
那如果根据NCBI查得目的片段序列，PCR后连上去是否可以呢？...

你的基因来源什么物种？是否有内含子？做什么类型的表达？原核？真核？植物？
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23楼2015-04-27 21:48:42
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monkey_pxs

金虫 (小有名气)
引用回帖:
23楼: Originally posted by stone2239 at 2015-04-27 21:48:42
你的基因来源什么物种？是否有内含子？做什么类型的表达？原核？真核？植物？...

我的基因来源于原核，不含有内含子，然后是想做目的基因过表达
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24楼2015-04-27 21:55:45
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hzhenzhen

新虫 (初入文坛)
★
monkey_pxs(金币+1): 谢谢参与
我也想知道怎么构建载体？构建载体难点是什么，从哪下手，大神在哪？

[ 发自小木虫客户端 ]
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25楼2015-04-27 23:09:38
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小猪没长毛

铁虫 (小有名气)
我也在困惑阶段
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27楼2015-04-30 11:09:04
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monkey_pxs

金虫 (小有名气)
引用回帖:
27楼: Originally posted by 小猪没长毛 at 2015-04-30 11:09:04
我也在困惑阶段

然后我已经把问题解决了，其实主要是ORF，我们在NCBI上会查到目的基因的序列，然后你可以通过DNAstar的orf finder去查找你的目的基因的ORF区在那里，然后我就发现我在NCBI上查得的目的基因的序列就是它的整个的ORF，然后我还不放心的，查到了这个目的基因的前后1000bp的碱基一起复制粘贴到DNAstar的orf finder上去查找，还是一样的结果。
恩，希望不会讲的很乱能对你的实验有帮助
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28楼2015-04-30 17:29:06
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dmbb2楼
2015-04-27 16:58   回复  
monkey_pxs(金币+1): 谢谢参与
假大空3楼
2015-04-27 17:07   回复  
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jixiangbao4楼
2015-04-27 17:13   回复  
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sz_kebaoyuan5楼
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tiandan3226楼
2015-04-27 17:16   回复  
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小木鸭7楼
2015-04-27 17:19   回复  
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mtw9228楼
2015-04-27 17:20   回复  
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8wangle9楼
2015-04-27 17:21   回复  
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tingting198210楼
2015-04-27 17:24   回复  
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jeangong11楼
2015-04-27 17:29   回复  
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syhorchid13楼
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81004313814楼
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kinple15楼
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bb
readytogo17楼
2015-04-27 17:46   回复  
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wenzhitian18楼
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wasxnbe19楼
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cxjzly200820楼
2015-04-27 17:57   回复  
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林家女孩26楼
2015-04-28 15:19   回复  
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