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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于基因异源表达
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zhoufenghou

金虫 (小有名气)

[求助] 关于基因异源表达

一个基因连到原核载体上，标签1-MCS-标签2的形式，我的目的基因插入MCS中，是否要去掉ATG和TAA，不去掉的话会有什么后果？谢谢
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1楼2013-07-20 15:22:08
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-07-20 21:48:48
如果你想在N端带标签1而不带标签2，不去掉ATG和TAA，要注意目的基因是与标签1在相同的阅读框。如果你想同时戴上标签1和2，需要去掉目的基因的TAA，并注意目的基因与标签的阅读框问题。不去掉表达在目的基因的终止密码子结束，不能戴上标签2。如果你想只带标签2而不带标签1，需要选一个酶切位点在标签1前面，一个酶切位点在CMS，并去掉TAA。
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2楼2013-07-20 15:30:35
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zhoufenghou

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-20 15:30:35
如果你想在N端带标签1而不带标签2，不去掉ATG和TAA，要注意目的基因是与标签1在相同的阅读框。如果你想同时戴上标签1和2，需要去掉目的基因的TAA，并注意目的基因与标签的阅读框问题。不去掉表达在目的基因的终止密 ...

把目的基因的ATG去掉有影响没？
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3楼2013-07-20 15:35:57
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-07-21 07:51:15
前面只要有起始密码子，而且能够保证你的基因的开放阅读框正确，而且你在前面设定了酶切位点，去掉自身的ATG没有影响。
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4楼2013-07-20 17:46:59
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by zhoufenghou at 2013-07-20 15:35:57
把目的基因的ATG去掉有影响没？...

做为中间的ATG会被翻译成蛋氨酸，去掉后融合蛋白少一个氨基酸，问题不大。做表达时除非选择特定的酶切位点，一般除了标签以外，融合蛋白还会多表达一下载体序列产生的几个氨基酸残基。
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5楼2013-07-20 22:43:39
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