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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 关于构建基因表达载体，以及基因开放阅读框
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monkey_pxs

金虫 (小有名气)

[交流] 关于构建基因表达载体，以及基因开放阅读框

求大神指导！！
我最近在构建基因表达载体，本来就想着从NCBI上查到目的基因片段，然后通过PCR得到目的片段，再连接到表达载体上构建得到重组质粒，但是查阅文献的时候，却发现很多构建表达载体的话，都会连接的是目的基因的开放阅读框，然后再表达，这点让我很困惑，所以特来开贴求大神指导一二
我想问问，如果我要构建目的基因表达载体，那么我应该
1. PCR目的基因片段连接到表达载体上进行表达即可？
2. PCR得到目的基因片段的ORF，连接到表达载体上进行表达即可？
3.将目的片段与其ORF一起克隆到我的表达载体上进行表达？
到底哪种做法是对的？而且不会影响我的实验结果？哦，忘了说，我是想做过表达的。
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1楼 2015-04-27 16:33:56
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)
★
monkey_pxs(金币+1): 谢谢参与
将ORF连到目的载体上表达
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21楼2015-04-27 20:20:49
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
22楼: Originally posted by monkey_pxs at 2015-04-27 20:28:47
那如果根据NCBI查得目的片段序列，PCR后连上去是否可以呢？...

你的基因来源什么物种？是否有内含子？做什么类型的表达？原核？真核？植物？
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23楼2015-04-27 21:48:42
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