应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » 基因敲除质粒PKD46质粒酶切位点选择
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 1635  |  回复: 3
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

玻璃花1

兑换贵宾

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

[求助] 基因敲除质粒PKD46质粒酶切位点选择 已有2人参与

最近想利用同源重组的方法做一个阴性菌的基因敲除，找到了PKD46这个质粒，但对其酶切位点分析，我可以利用的双酶切位点好少，一种选择是Drd I/Sap I/Bst E II三选一，但这三种酶不是常用酶，没有共用Buffer,网上说其酶切效果不稳定（不好）；第二种选择是EcoICRI 和SacI,但这两个酶切位点靠的很近很近，没法切。。。
但是文献报道中，PKD46用的很多，想问问酶切位点是怎么选的？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-04-18 22:01:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

红塔山和云烟

兑换贵宾

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

【答案】应助回帖

不知道你为什么要酶切pKD46质粒，在敲除基因的时候这个质粒只是用来表达三个重组酶的，并不要进行酶切。
赞一下(1人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

玻璃花1
3楼2015-08-04 11:20:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 4 个回答

暗红柳绿

管理员

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
玻璃花1: 金币+50, ★★★很有帮助 2015-08-24 14:03:26
可以用pKD46质粒里面的酶切位点，用你们实验室已经有的限制性内切酶做个酶切。多做几种，有单酶切，也有双酶切甚至3酶切，不一定要单酶切位点的酶。
没有酶切位点的也可以试试，如果能切开，那就说明质粒有问题。

(  1) BamHI     : GGATCC               :   1 Sites
      1155- 1154:  6329 base

( 2) EcoRI     : GAATTC               :   2 Sites
      2725- 1215:  4820 base
      1216- 2724:  1509 base

( 3) EcoRV     : GATATC               :   1 Sites
       302-  301:  6329 base

( 4) NcoI      : CCATGG               :   1 Sites
      3390- 3389:  6329 base

( 5) NotI      : GCGGCCGC             :   1 Sites
      4834- 4833:  6329 base

( 5) PstI      : CTGCAG               :   2 Sites
      2471- 2223:  6082 base
      2224- 2470:   247 base

( 6) SacI      : GAGCTC               :   1 Sites
      1226- 1225:  6329 base

( 7) SalI      : GTCGAC               :   1 Sites
      1727- 1726:  6329 base

( 8) SpeI      : ACTAGT               :   1 Sites
      4514- 4513:  6329 base

没有酶切位点的：
HindIII    KpnI       NdeI       NheI      
SfiI       XbaI       XhoI
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2015-07-30 19:21:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

玻璃花1

兑换贵宾

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by 红塔山和云烟 at 2015-08-04 11:20:31
不知道你为什么要酶切pKD46质粒，在敲除基因的时候这个质粒只是用来表达三个重组酶的，并不要进行酶切。

是的，当时没搞明白，后来并没用这样的方式
赞一下 回复此楼
4楼2015-08-24 14:05:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 4 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 环境工程 085701，267求调剂 +14 minht 2026-03-29 15/750 2026-04-01 07:23 by sunshine0013
[考研] 0805求调剂 +5 是水分 2026-03-31 5/250 2026-03-31 20:48 by yuq
[论文投稿] chinese chemical letters英文版投稿求助 130+4 Yishengeryi 2026-03-30 4/200 2026-03-31 19:52 by babero
[考研] 070300化学求调剂 +12 小黄鸭宝 2026-03-30 12/600 2026-03-31 19:15 by 253863592
[考研] 一志愿南昌大学324求调剂 +6 hanamiko 2026-03-29 6/300 2026-03-31 16:35 by hypershenger
[考研] 263求调剂 +3 DDDDuu 2026-03-27 3/150 2026-03-31 16:21 by 土木硕士招生
[考研] 物理学调剂 +4 小羊36 2026-03-30 4/200 2026-03-31 16:16 by lishahe
[考研] 277跪求调剂 +8 1915668 2026-03-27 13/650 2026-03-31 14:58 by 王亮_大连医科大
[考研] 一志愿哈尔滨工业大学材料与化工方向336分 +13 辰沐5211314 2026-03-26 13/650 2026-03-31 14:37 by 记事本2026
[考研] 本科211安全工程，初试290分，求调剂 +3 2719846834 2026-03-28 3/150 2026-03-31 13:52 by 热情沙漠
[考研] 334求调剂 +7 Trying] 2026-03-31 7/350 2026-03-31 12:33 by 无际的草原
[考研] 291求调剂 +12 Y-cap 2026-03-29 15/750 2026-03-31 09:25 by Huaxue_Wang
[考研] 327求调剂 +5 小卡不卡. 2026-03-29 5/250 2026-03-30 19:30 by Wang200018
[考研] 一志愿南开大学0710生物学359求调剂 +5 兔兔兔111223314 2026-03-29 7/350 2026-03-30 18:29 by 兔兔兔111223314
[考研] 298求调剂 +4 种圣赐 2026-03-28 4/200 2026-03-29 08:42 by q1092522407
[考研] 0856求调剂 +13 zhn03 2026-03-25 14/700 2026-03-29 08:13 by fmesaito
[考研] 11408软件工程求调剂 +3 Qiu学ing 2026-03-28 3/150 2026-03-28 21:50 by zhq0425
[考研] 070300求调剂306分 +4 26要上岸 2026-03-27 4/200 2026-03-28 13:06 by 唐沐儿
[考研] 308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-27 7/350 2026-03-28 07:43 by 热情沙漠
[考研] 085600，材料与化工321分，求调剂 +9 大馋小子 2026-03-27 9/450 2026-03-27 14:30 by mmm just
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭