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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 新手请教一下，换了个基因就不表达是什么原因
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zzhjiangnan

银虫 (小有名气)

[求助] 新手请教一下，换了个基因就不表达是什么原因 已有2人参与

我的质粒上卡纳霉素基因表达量很高，但是我保留其他组件（ATG之前的序列），在同一质粒上只把卡那霉素基因换成另一种蛋白基因，就不表达了，这个从理论上应该怎么讲？求各位大神帮忙指点分析一下。
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1楼 2014-10-29 22:44:33
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sun_in_night

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-10-31 13:35:38
信息好少。。。你怎么替换的kan基因？如果是酶切，确定酶切位点不会切断其他的质粒序列？如果你替换了kan，你怎么筛选的你的质粒，还有第二个抗性基因吗？

楼主最好把质粒的图放上来，这样才便于大家帮你分析
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2楼2014-10-29 23:40:36
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灰血动物

金虫 (小有名气)
蛋白表达是个较为复杂的问题

同源 异源？

宿主选择?

稀有密码子？

诱导条件优化等等。。。。。。
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未完成
3楼2014-10-31 11:27:00
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zzhjiangnan

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by sun_in_night at 2014-10-29 23:40:36
信息好少。。。你怎么替换的kan基因？如果是酶切，确定酶切位点不会切断其他的质粒序列？如果你替换了kan，你怎么筛选的你的质粒，还有第二个抗性基因吗？

楼主最好把质粒的图放上来，这样才便于大家帮你分析

不好意思我说的太理论了，我是把质粒kan基因前的1000bp片段克隆出来，连到这个质粒的我的目的基因前面（1000bp和我的目的基因之间有6bp的酶切位点），但是目的基因就不表达。
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4楼2014-10-31 13:23:50
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zzhjiangnan

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 灰血动物 at 2014-10-31 11:27:00
蛋白表达是个较为复杂的问题

同源 异源？

宿主选择?

稀有密码子？

诱导条件优化等等。。。。。。

在谷氨酸棒杆菌里用一种质粒，它的kan抗性蛋白表达量很高，我把质粒kan基因前的1000bp片段克隆出来，连到这个质粒的我的目的基因前面（1000bp和我的目的基因之间有6bp的酶切位点），但是目的基因就不表达。是密码子的问题吗？
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5楼2014-10-31 13:26:18
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dt_lilin

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
zzhjiangnan: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-11-04 21:52:05
基因不表达的影响因素太多了， 一般为了较好的表达， 可以从

亲和标签的选择/表达条件/密码子

这三个方面进行考虑， 详细的信息可以参考 基因表达优化
http://www.detaibio.com/gene-expression-optimization.html
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6楼2014-11-03 16:03:35
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